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本發(fā)明公開了一種酶提取紫錐菊多糖的方法，將紫錐菊地上部分粉碎成適宜大小，脫脂，提取，加酶制劑酶解、滅酶、繼續(xù)高溫提取、離心、上清液進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，醇沉，沉淀依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，復(fù)溶后，噴干，得紫錐菊多糖。本發(fā)明的有益效果是：本制備方法，具有反應(yīng)條件溫和、提取時間短、提取率高等優(yōu)點，并且重現(xiàn)性高，穩(wěn)定，制備得到的紫錐菊多糖溶解性較好，外觀均一、水溶性好，并且獲得較好的活性組分，具有較好的免疫活性。

本發(fā)明提出了一種影響精子功能的唾液酸酶檢測方法。該方法是一種新的評估精子質(zhì)量與功能的實驗室檢測方法，可為臨床原因不明的男性不育患者提供檢測及臨床咨詢。首次報道精子唾液酸酶的表達與受孕能力的影響（7年原創(chuàng)研究歷史），國際與國內(nèi)領(lǐng)先地位。已新近申請4項中國相關(guān)專利和2項國際專利協(xié)定（ PCT）。

本項目來源于國家863計劃項目成果，核心技術(shù)已獲得國家發(fā)明專利。復(fù)合酶皮膠原處理劑系列產(chǎn)品有A-G7個系列、12個品種，這些酶制劑可以分別用于以下不同的用途：（1）豬皮的臀部處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑A和復(fù)合酶皮膠原處理劑B）；（2）牛皮、山羊皮的頸紋處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑C）；（3）豬皮、山羊皮全皮脫毛處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑D），這種脫毛完全不同于文件1的有溫有浴酶脫毛，它是通過涂刷在皮的肉面進行脫毛的；（4）水解動物皮提取膠原（復(fù)合酶皮膠原處理劑E）；（5）豬皮、牛皮以及羊皮的浸酸軟化和藍坯革處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑F）；（6）豬、牛、羊皮的軟化處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑G）。經(jīng)批量生產(chǎn)并應(yīng)用結(jié)果表明，本項目系列產(chǎn)品，綜合性能優(yōu)于或接近國內(nèi)外同類產(chǎn)品，技術(shù)成熟。

由于基于酶抑制法的農(nóng)藥快速 檢驗中所使用的動物來源的酣酶普遍存在著提取成本高，活 性不穩(wěn)定， 不易于保存的間題。本團隊從蕓豆中篩選并純化出一種植物酣酶。通過底

性能特點： 1、微機控制，觸摸面板，LCD顯示。 2、采用交流變頻電機。 3、可直接設(shè)定轉(zhuǎn)速，自動計算RCF值。可直接設(shè)定RCF值，自動轉(zhuǎn)換成轉(zhuǎn)速。 4、具有10檔升降速。 5、運行中可修改參數(shù)，運行參數(shù)自動記憶。 6、具有10種自定義程序存儲功能。 7、具有軟剎車功能。 8、具有轉(zhuǎn)子號識別功能。 9、具有超速、不平衡和門蓋安全保護功能，并在顯示窗口顯示故障信息和聲音報警。

本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種豇豆胰蛋白酶抑制劑基因、及其應(yīng)用、大量制備豇豆胰蛋白酶抑制劑的方法。如上所述本發(fā)明的發(fā)明人首先利用pcr反應(yīng)從豇豆基因組dna中直接獲得cpti基因(cpti基因不含有內(nèi)含子)，然后優(yōu)化改造所述cpti序列，改造后的序列在大腸桿菌中的表達量和表達比活性都有顯著改進。

項目成果/簡介:本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種豇豆胰蛋白酶抑制劑基因、及其應(yīng)用、大量制備豇豆胰蛋白酶抑制劑的方法。如上所述本發(fā)明的發(fā)明人首先利用pcr反應(yīng)從豇豆基因組dna中直接獲得cpti基因(cpti基因不含有內(nèi)含子)，然后優(yōu)化改造所述cpti序列，改造后的序列在大腸桿菌中的表達量和表達比活性都有顯著改進。

常見的納米酶大多數(shù)是金屬化合物納米顆粒，其催化活性主要是來自在納米顆粒表面的金屬離子。在自然界中，生物酶的特征表明活性位點和支持、穩(wěn)定活性位點的網(wǎng)絡(luò)環(huán)境對于高催化效率同樣重要。通過調(diào)整活性位點的成分和環(huán)境可以實現(xiàn)高的活性和選擇性。水凝膠是一類具有良好生物相容性的三維親水網(wǎng)絡(luò)材料，其結(jié)構(gòu)可以有效地保護酶分子活性中心，同時提供更好的底物遷移微環(huán)境，從而實現(xiàn)有效的催化作用，載酶水凝膠材料已成為生物學(xué)研究中的熱點。納米凝膠為水凝膠的納米粒子，具有類似于宏觀水凝膠材料的親水網(wǎng)絡(luò)及類似流體的傳輸特性，其納米的尺寸可以作為進一步體內(nèi)生物應(yīng)用的理想載體。在受限的納米空間中實現(xiàn)修飾或組裝以獲得雜化納米凝膠仍然存在挑戰(zhàn)。應(yīng)對這一挑戰(zhàn)，同濟大學(xué)化學(xué)科學(xué)與工程學(xué)院王啟剛團隊從仿生的角度出發(fā)，設(shè)計了一種酶催化的原子轉(zhuǎn)移自由基聚合（ATRPase）和金屬配位交聯(lián)方法成功制備出納米人工多酶凝膠體系。該體系具有模擬超氧化物歧化酶（SOD-like）和過氧化物酶（POD-like）特性，可以實現(xiàn)腫瘤微環(huán)境級聯(lián)催化的響應(yīng)成像。日前，相關(guān)研究成果以“Multienzyme‐Mimic Nanogels Synthesized by Biocatalytic ATRP and Metal Coordination for Bioresponsive Fluorescence Imaging”為題，發(fā)表在國際著名學(xué)術(shù)期刊 Angewandte Chemie International Edition （《德國應(yīng)用化學(xué)》） 上。同濟大學(xué)化學(xué)科學(xué)與工程學(xué)院為該文的唯一通訊作者單位，碩士生齊美園為第一作者，王霞副教授和王啟剛教授為共同通訊作者。 圖1.（a）人工多酶凝膠體系的ATRPase及配位交聯(lián)制備流程（b）模擬SOD和POD級聯(lián)酶催化的腫瘤微環(huán)境響應(yīng)的熒光成像機制。研究人員首先在納米粒子表面修飾酶催化的原子轉(zhuǎn)移自由基聚合的引發(fā)劑(-Br)，以具有良好生物相容性的生物酶為催化劑，修飾有雙鍵的賴氨酸（N-acryloyl-L-lysine）為聚合單體，在納米粒子周圍聚合制備得到聚賴氨酸高分子刷，最后通過亞鐵配位交聯(lián)，從而構(gòu)建出具有多酶活性的人工多酶凝膠體系（如圖1所示）。凝膠體系中高分散的Fe離子一方面作為凝膠網(wǎng)絡(luò)的交聯(lián)劑，同時作為模擬酶的活性中心。通過模擬SOD和POD酶，先將腫瘤部位高水平的O 2 ?? 催化轉(zhuǎn)化為H 2 O 2 ，進一步基于腫瘤部位提升的H 2 O 2 通過級聯(lián)酶催化反應(yīng)實現(xiàn)腫瘤微環(huán)境響應(yīng)的安全、高效的腫瘤成像。該人工多酶凝膠體系類似自然的過氧化物酶催化機制不產(chǎn)生羥基自由基，具有低毒性和高生物安全性。同時，ATRPase方法和金屬配位交聯(lián)技術(shù)可進一步實現(xiàn)多種納米材料體系的制備，用于藥物輸送和其他生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。該研究成果得到了國家自然科學(xué)基金、國家重點研發(fā)計劃等經(jīng)費支持以及中國科學(xué)院強磁場科學(xué)中心的技術(shù)支持。王啟剛教授團隊多年來一直致力于高分子凝膠固定酶技術(shù)及其生物診療應(yīng)用，近5年累計以通訊作者在 Adv.Mater. ,  Nat. Commun. ,  Angew. Chem. Inter. Ed. 等期刊發(fā)表SCI論文50多篇。文獻鏈接：https://www.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/anie.202002331  PDF：anie_202002331.pdf課題組網(wǎng)站：https://qgwang.tongji.edu.cn/

磷脂酶 D 是一種用于磷脂改性的工業(yè)化生產(chǎn)用酶，近年來研究較多且效果比較明顯的是通過微生物發(fā)酵的方法獲得磷脂酶 D。磷脂酶 D 主要用于兩個方面：一是從卵磷脂出發(fā)，通過磷酸基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，制備含量較少的磷脂化合物，如磷脂酰絲氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）等；二是通過轉(zhuǎn)移反應(yīng)合成新的磷脂衍生物，用在藥物學(xué)領(lǐng)域。磷脂酰絲氨酸是磷脂中的一種，天然含量稀少，但它是大腦中主要的酸性磷脂，能控制和調(diào)節(jié)細胞膜關(guān)鍵蛋白的功能狀態(tài)，提高腦細胞的活力，改善大腦功能、修復(fù)大腦損傷，成為“腦專一性營養(yǎng)物質(zhì)”。本項目通過菌種篩選獲得一株高產(chǎn)磷脂酶 D 的肉桂鏈霉菌菌株。通過發(fā)酵優(yōu)化，發(fā)酵酶活可達到 10U/mL 以上，可用于 PS、PI 的生產(chǎn)。 

傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物，如烷化劑、鉑類試劑、作用于核酸合成的藥物、作用于微管蛋白合成 的藥物等，一般存在毒性較大、選擇性較低等問題，因此，研究尋找安全有效、選擇性較好的 靶向性抗腫瘤藥物具有重大的科學(xué)意義和巨大的社會價值。 組蛋白去乙酰化酶 (Histone Deacetylase，HDAC) 是治療腫瘤的新靶標(biāo)，其抑制劑 Vorinostat (SAHA) 和Romidepsin (FK228) 已分別于2006年和2009年經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)上市用于治 療表皮T細胞淋巴瘤；該類抑制劑顯示出良好的腫瘤治療效果及較小的毒副作用，是目前最具 前景的抗腫瘤藥物之一。 本項目綜合運用分子動力學(xué)模擬、計算機輔助藥物設(shè)計、化學(xué)合成、藥理學(xué)活性測試等 方法，通過“設(shè)計－合成/修飾－測試”的多次循環(huán)，開發(fā)了一系列結(jié)構(gòu)新穎的四氫-γ-咔啉骨 架的HDAC抑制劑。該類抑制劑可以有效抑制HDAC總酶及HDAC1的活性，多個化合物的酶 活性都低于50 nM；并且，該系列多數(shù)化合物對Hela、A549、HCT116、K562、MCF-7等腫瘤細 胞株表現(xiàn)出比陽性對照藥物SAHA更高的活性，多個化合物對所測腫瘤細胞株的抑制活性低于 1 μM，而對于人類正常細胞無抑制活性；在動物模型試驗中，代表性化合物對接種Lewis肺癌 荷瘤小鼠模型表現(xiàn)出良好的治療效果，且沒有觀察到明顯的體重變化和毒性反應(yīng)。因此，該類 HDAC抑制劑可以作為藥物先導(dǎo)化合物用于制備抗腫瘤藥物，為廣大腫瘤病患者帶來福音，也 向開發(fā)我國具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗腫瘤藥物邁進一步。