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利用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法對(duì)傳統(tǒng)抗血清制備技術(shù)進(jìn)行改造，突破 了過(guò)去抗血清生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)為主造成的不確定性和不系統(tǒng)性，提高了抗血 清制備的技術(shù)含量和生產(chǎn)效率。有效去除抗血清中的非特異性抗體， 從而實(shí)現(xiàn)抗體制備的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)模化生產(chǎn)，同時(shí)也降低了生產(chǎn)成本。 免疫磁珠分離技術(shù)的最突出的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，可以明顯提高檢 測(cè)的靈敏性，縮短病原體的檢測(cè)時(shí)間一至數(shù)天，并且可從復(fù)雜的樣品 中直接分離病原體，降低標(biāo)本中抑制物的干擾，提高靈敏度。 已生產(chǎn)出 3 種診斷血清產(chǎn)品，包括“致病性大腸桿菌 O 抗原診 斷血清試劑盒”、“大腸桿菌 H 抗原全套診斷血清試劑盒”和“志賀氏菌 O 抗原全套診斷血清試劑盒”，共計(jì) 147 種高特異性抗體。 經(jīng)中 國(guó) CDC 使用證實(shí)，該血清具有反應(yīng)速度快、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，與日 本生研同類(lèi)血清質(zhì)量相當(dāng)，遠(yuǎn)優(yōu)于國(guó)內(nèi)同類(lèi)產(chǎn)品。 繼續(xù)在市場(chǎng)調(diào)研的基礎(chǔ)上，再進(jìn)行 11 種改類(lèi)試劑盒的研發(fā)和生 產(chǎn)，填補(bǔ)國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)空白。 本項(xiàng)目完成后，實(shí)施單位將可生產(chǎn) 12 種診斷血清試劑盒（包括 前期已完成開(kāi)發(fā)的 3 種），按每個(gè)疾控中心每年需求每種試劑盒一套 計(jì)算，總需求量約 1200 套。此外，進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫單位對(duì)某些種類(lèi) 的血清亦有一定需求，約為 300 套。按每套試劑盒平均 1 萬(wàn)元的售價(jià) 計(jì)算，每年的市場(chǎng)可達(dá) 1500 萬(wàn)元。 免疫磁珠分離試劑盒可廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)，食品檢驗(yàn)，水質(zhì)／ 環(huán)境檢驗(yàn)，獸藥檢驗(yàn)等，市場(chǎng)非常之大，現(xiàn)主要的生產(chǎn)商為國(guó)外的 Dynal 和 Matrix 公司，以 Dynal 公司為例，其每年可創(chuàng)造數(shù)十億美元 的銷(xiāo)售額。由于依賴(lài)進(jìn)口，國(guó)內(nèi)多家疾病預(yù)防控制和出入境檢驗(yàn)檢疫 單位已經(jīng)向項(xiàng)目實(shí)施單位提出了產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)意向。該產(chǎn)品研發(fā)成本約 為每毫升 600 元，銷(xiāo)售價(jià)格在每毫升 2000 元左右，顯示了良好的市 場(chǎng)前景。

利用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法對(duì)傳統(tǒng)抗血清制備技術(shù)進(jìn)行改造，突破了過(guò)去抗血清生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)為主造成的不確定性和不系統(tǒng)性，提高了抗血清制備的技術(shù)含量和生產(chǎn)效率。有效去除抗血清中的非特異性抗體，從而實(shí)現(xiàn)抗體制備的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)模化生產(chǎn)，同時(shí)也降低了生產(chǎn)成本。 免疫磁珠分離技術(shù)的最突出的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，可以明顯提高檢測(cè)的靈敏性，縮短病原體的檢測(cè)時(shí)間一至數(shù)天，并且可從復(fù)雜的樣品中直接分離病原體，降低標(biāo)本中抑制物的干擾，提高靈敏度。 已生產(chǎn)出3種診斷血清產(chǎn)品，包括“致病性大腸桿菌O抗原診斷血清試劑

中國(guó)是食用菌生產(chǎn)大國(guó)，據(jù)2009年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，2008年全國(guó)食用菌產(chǎn)量約為1730萬(wàn)噸，占全世界總產(chǎn)量的70%以上。絕大多數(shù)菌糠仍然是廢棄或進(jìn)行就地燃燒，這樣既浪費(fèi)了資源又污染了環(huán)境。銅山縣是食用菌生產(chǎn)大縣，縣域內(nèi)的三堡鎮(zhèn)徐村被評(píng)為“中國(guó)金針菇之鄉(xiāng)”，菌糠資源豐富。江蘇東寶糧油集團(tuán)有限公司和江蘇省藥用植物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合開(kāi)發(fā)利用菌糠替代部分糧食原料生產(chǎn)生物飼料項(xiàng)目。菌糠的合理利用延長(zhǎng)了食用菌種植的生物循環(huán)鏈條，菌糠的再利用不僅能綜合利用資源，而且可以消除環(huán)境污染，節(jié)省開(kāi)支，提高經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益。合作單位：江蘇省藥用植物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、東寶糧油有限公司

依托山東省食用菌體系崗位專(zhuān)家程顯好教授團(tuán)隊(duì)，采用細(xì)胞工程育種、核輻射技術(shù)育種和分子標(biāo)記技術(shù)育種等先進(jìn)育種技術(shù)，培育了牛樟芝、桑黃、白鮑菇、黑鮑菇、杏鮑菇、姬松茸、舞茸菇、榆黃菇、雞腿菇、黃傘、羊肚菌等多種優(yōu)良菌株，篩選高產(chǎn)高效栽培模式16個(gè)。其中通過(guò)原生質(zhì)體融合、紫外誘導(dǎo)、交配型基因檢測(cè)及田間實(shí)驗(yàn)篩選，培育出3株高耐鹽耐堿的羊肚菌品種，分別為Mel-2、Mel-7、Mel-22，在全省開(kāi)展示范推廣300多畝，畝產(chǎn)量均在350kg左右，取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。 同時(shí)，本團(tuán)隊(duì)首次從臺(tái)灣引進(jìn)珍稀藥用菌牛樟芝，省內(nèi)利用蘋(píng)果木栽培牛樟芝獲得了成功，其主要藥用成分與牛樟木栽培相同，這對(duì)牛樟芝的開(kāi)發(fā)及牛樟樹(shù)的保護(hù)起到積極作用。 近三年，團(tuán)隊(duì)服務(wù)大型食用菌企業(yè)12家，服務(wù)煙臺(tái)--巫山東西協(xié)作扶貧工作，服務(wù)萊山區(qū)院格莊街道鄭家莊村農(nóng)民合作社等新型農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)體30余家，累計(jì)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)值1.5億元以上，解決就業(yè)崗位500個(gè)以上，經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益顯著。

目前，沙門(mén)菌的檢測(cè)主要還是采用傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)方法，通過(guò)前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)以及血清學(xué)鑒定的步驟一步一步進(jìn)行檢測(cè)，工作量大且耗時(shí)長(zhǎng)。PCR及Real Time PCR等分子生物學(xué)技術(shù)雖然具有快速、簡(jiǎn)便等大量?jī)?yōu)點(diǎn)，卻較少應(yīng)用，主要原因是以DNA為模版的PCR及Real Time PCR技術(shù)并不能區(qū)分細(xì)菌的死活細(xì)胞，樣品中存在的死細(xì)胞可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。本課題將EMA對(duì)死活細(xì)胞的鑒別作用與Real Time PCR的靈敏度、特異性相結(jié)合，有效克服了DNA分子檢測(cè)手段不能鑒別死活細(xì)胞的弊端，在實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的快速、簡(jiǎn)便的同時(shí)大大提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。確證了EMA-Real Time PCR可實(shí)現(xiàn)實(shí)際樣品中沙門(mén)菌活細(xì)胞的快速測(cè)定，可將EMA-Real Time PCR推廣到實(shí)際檢測(cè)工作中，如此便可大大縮短檢測(cè)所需的時(shí)間，節(jié)省大量的人力、物力。研究成果具有重大的應(yīng)用前景。 社會(huì)效益：EMA-Real Time PCR可用于實(shí)際樣品中沙門(mén)菌活細(xì)胞的快速檢測(cè)，建立一種快速檢測(cè)病原菌的新方法體系，用于實(shí)際的檢測(cè)工作中，如此不僅可以減少食品安全日常監(jiān)測(cè)的工作量，更重要的是，在突發(fā)性食物中毒事件中，大大縮短了病原菌檢測(cè)所需時(shí)間，提高了反應(yīng)效率，為突發(fā)性公共衛(wèi)生事件的解決提供更好的技術(shù)平臺(tái)。

我公司曾先后聯(lián)合山東省農(nóng)科院、魯東大學(xué)等共同研究開(kāi)發(fā)“野生雞油菌馴化養(yǎng)殖關(guān)鍵技術(shù)”，每年都進(jìn)行野生雞油菌的采集、分離提純等工作，但至今未馴化養(yǎng)殖成功。尋求產(chǎn)學(xué)研合作伙伴，共同研發(fā)野生雞油菌分離提純方法和防止雜菌感染的關(guān)鍵技術(shù)，實(shí)現(xiàn)野生雞油菌工廠(chǎng)化規(guī)模養(yǎng)殖

本發(fā)明涉及一種利用噬菌體PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因轉(zhuǎn)化制備鴨疫里默氏菌前菌影疫苗的方法與應(yīng)用方法。該方案首先將噬菌體PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因通過(guò)柔性連接臂(Gly4Ser)3連接成串聯(lián)基因，并進(jìn)一步構(gòu)建溫控表達(dá)載體pBV-E-SN。將pBV-E-SN電擊轉(zhuǎn)化進(jìn)入鴨疫里默氏菌原生質(zhì)體，篩選陽(yáng)性克隆28℃增菌培養(yǎng)。分離菌體加保護(hù)劑后分裝、冷凍干燥。本發(fā)明所制備的活菌疫苗經(jīng)飲水免疫，既可以刺激呼吸道和消化道黏膜的局部免疫，也可以激發(fā)體液免疫。

本發(fā)明公開(kāi)了廿二碳五烯酸乙醇胺在提高植物灰霉病抗性中的應(yīng)用以及在制備提高植物灰霉病抗性的制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明以廿二碳五烯酸乙醇胺為主要有效成分制備的制劑，通過(guò)誘導(dǎo)植物體內(nèi)的茉莉酸以及乙烯的信號(hào)路徑，可顯著增強(qiáng)植物對(duì)灰霉病的抗性，減少因灰霉病給植株帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失。采用本發(fā)明制劑防治植物灰霉病簡(jiǎn)單易行，成本較低，可顯著延遲和抑制灰葡萄孢病原菌在葉片上的生長(zhǎng)及病害的擴(kuò)散，大大提高了植株對(duì)灰霉病的抗性。

茶葉是我國(guó)重要的農(nóng)產(chǎn)品之一， 也是傳統(tǒng)的大宗出口商品。在茶葉種植中，以氯氝菊酣為主

成果與項(xiàng)目的背景及主要用途： 菌糠是指以棉籽殼、木屑、稻草、玉米芯、甘蔗渣及多種農(nóng)作物秸稈、工業(yè) 廢料（如酒糟、醋糟、造紙廠(chǎng)廢液及制藥廠(chǎng)黃漿廢液等）為主要原料栽培食用菌 后的廢棄培養(yǎng)基。菌糠主要含有物質(zhì)是纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、抗?fàn)I養(yǎng)因子 和少量的蛋白質(zhì)，這些原料作為培養(yǎng)基栽培食用菌后，通過(guò)食用菌菌體的生物固 氮作用、酶解作用等一系列生物轉(zhuǎn)化過(guò)程，粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量均比不經(jīng)過(guò)食 用菌發(fā)酵前提高二倍以上，纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等均已被不同程度的降解， 其中粗纖維素降低了 50%以上，木質(zhì)素降低 30%以上，棉酚降低 60%以上，同 時(shí)還產(chǎn)生了多種糖類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)和生物活性物質(zhì)。據(jù)報(bào)道，我國(guó)菌糠年產(chǎn)量在 200 萬(wàn)噸以上大部分當(dāng)作廢料而被浪費(fèi)掉，給環(huán)境造成了很大的污染，一些菌糠 可以被用作畜禽飼料，并且用廢棄菌糠來(lái)改良土壤可以做到廢物利用、改善環(huán)境， 實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。 我國(guó)土壤絕大部分嚴(yán)重缺磷、缺鉀，化學(xué)肥料中的磷元素和鉀元素在施肥后 很快被固化，不再能夠被植物使用。解磷菌、解鉀菌及固氮菌是生物益生菌肥中 的主要菌株，使用這些土壤益生菌可以提高土壤中植物可利用氮磷鉀的利用率。 如果能夠利用廢棄菌糠大規(guī)模培養(yǎng)這三種菌，制備成為生物菌肥，將會(huì)極大的增 211天津大學(xué)科技成果選編 加菌糠做為肥料的優(yōu)勢(shì)。本項(xiàng)目利用菌糠培養(yǎng)解磷菌、解鉀菌、固氮菌，制備成 為生物菌肥，預(yù)期產(chǎn)生極大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。 技術(shù)原理與工藝流程簡(jiǎn)介： 本項(xiàng)目擬利用處理后的廢棄菌糠殘?jiān)囵B(yǎng)酵母、解磷菌、解鉀菌、固氮菌， 優(yōu)化發(fā)酵條件，提高菌體量，獲得制備微生物菌肥的最佳工藝路線(xiàn)。 天津大學(xué)從農(nóng)業(yè)廢棄物堆肥中篩選出 7 株解磷能力較強(qiáng)的菌株，其中菌株 FL7 表現(xiàn)出較好的解磷效果，F(xiàn)L7 解磷量為 436.63mg/L。該菌株已經(jīng)于 2010 年 7 月 13 日在中國(guó)微生物菌種保藏中心進(jìn)行保藏（保藏號(hào)：CGMCC NO.4008）。 本課題組還從農(nóng)業(yè)廢棄物堆肥中篩選得到解鉀菌 K3、固氮菌 N1。解鉀菌 K3 解 鉀量達(dá) 4.10mg/L、固氮菌 N1 固氮量為 1.81×10—2mol/L。 另外，天津大學(xué)已經(jīng)建立了以菌糠為基質(zhì)培養(yǎng)解磷、解鉀、固氮菌的發(fā)酵條 件，經(jīng)過(guò)發(fā)酵條件優(yōu)化，制備的菌肥中三種菌的含量達(dá)到 48.62×108CFU/g，其 中解磷菌 2.4×108cfu/g，解鉀菌 25.22×108cfu/g，固氮菌 21×108cfu/g，均遠(yuǎn)高于 國(guó)標(biāo)。 應(yīng)用領(lǐng)域：生物、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域 合作方式及條件：具體面議