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在石油開采、運(yùn)輸和使用中不可避免的會(huì)造成對(duì)周圍環(huán)境的污染，尤其是對(duì)土壤生態(tài)系統(tǒng)的污染日趨嚴(yán)重。對(duì)于石油污染土壤生態(tài)的修復(fù)，國(guó)內(nèi)外已有一些研究，但是，還未見高密度、高活性，能原位大面積使用的降解石油、修復(fù)石油污染土壤生態(tài)的菌制劑的報(bào)道。本發(fā)明涉及一種降解石油、修復(fù)石油污染土壤生態(tài)菌制劑及其制備方法。降解石油、修復(fù)石油污染土壤生態(tài)的菌制劑是由巨大芽孢桿菌、熒光假單胞菌、糞鏈球菌和熱帶假絲酵母經(jīng)優(yōu)化組合組成的復(fù)合菌群，其中各組分的配比是1～2∶1∶1∶0.5～1。

本發(fā)明涉及一種芽胞菌屬的菌株，該菌株是短小芽胞桿菌（Bacilluspumilus）WP8；保藏編號(hào)為CGMCCNo.5206。本發(fā)明使用時(shí)僅需用該菌株浸種10~20min，晾干栽種即可，具有用量省、見效快、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，可節(jié)約20%~70%農(nóng)藥化肥投入量，對(duì)多種病害的生防效果達(dá)60%以上，有效地解決了多種果蔬、作物生產(chǎn)中過度依賴農(nóng)藥化肥的問題。

本發(fā)明提出一株黑曲霉菌株及發(fā)酵菌劑及其應(yīng)用。本發(fā)明提出一種黑曲霉H201KP280086菌株，該菌株的分類命名為黑曲霉Aspergillus niger，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCC No.3.17612。本發(fā)明的黑曲霉Aspergillus niger H201KP280086對(duì)花生殼中的纖維素、半纖維素和果膠組分同時(shí)具有較強(qiáng)的分解能力。本發(fā)明的高效花生殼降解真菌所制成的菌劑，可以加速花生殼基質(zhì)的發(fā)酵過程，提高基質(zhì)成品質(zhì)量，為花生殼的有效利用提供了一條良好途徑，減少了資源浪費(fèi)。

一、項(xiàng)目分類 顯著效益成果轉(zhuǎn)化 二、技術(shù)分析 為了解決食用菌采后品質(zhì)易劣變、貨架期短等問題，研究團(tuán)隊(duì)基于食用菌采后生理特點(diǎn)，利用納米保鮮技術(shù)，以聚乙烯為基質(zhì)，研制了一種適合新鮮食用菌保鮮的納米包裝材料。本項(xiàng)成果獲得國(guó)家授權(quán)發(fā)明專利3項(xiàng)（ZL201010293262.3、ZL201410366090.6、ZL201610188182.9），其中2項(xiàng)專利已成功轉(zhuǎn)讓，產(chǎn)品在江蘇省灌南縣金凱包裝有限公司實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)。 納米包裝膜厚度為40 μm，與普通聚乙烯包裝膜相比，縱向拉伸強(qiáng)度提高了26.91%，水蒸氣透過率降低了37.41%，CO2透過率降低了6.0%，O2透過率降低了8.0%。納米保鮮技術(shù)的應(yīng)用不僅顯著提高包裝材料的機(jī)械性能，并賦予了包材良好的抑菌、氣體調(diào)節(jié)和清除自由基等特性，延緩了食用菌營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和風(fēng)味物質(zhì)的降解，將金針菇、雙孢菇、杏鮑菇和草菇的貨架期從14天、4天、17天和2天分別延長(zhǎng)至22天、10天、35天和6天。

該技術(shù)利用生鮮水果、蔬菜、食用菌加工副產(chǎn)物，制作曲奇、餅干、面包、 面條、饅頭等營(yíng)養(yǎng)糕點(diǎn)，該技術(shù)適合糕點(diǎn)加工企業(yè)、面包生產(chǎn)企業(yè)、大眾面食 生產(chǎn)企業(yè)。技術(shù)解決了生鮮果、菜、菌加工副產(chǎn)物綜合高效利用問題，利用將 生鮮果、菜、菌的營(yíng)養(yǎng)與保健功效與糕點(diǎn)、面點(diǎn)相結(jié)合，改善和提高了普通糕 點(diǎn)及面食制品的營(yíng)養(yǎng)與功能，增加了糕點(diǎn)及面食制品的花色品種，以滿足消費(fèi) 者的多樣化需求。 

該發(fā)明屬于植物病害生物防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于油菜根腫病生物防治的菌株擬康寧木霉ReTk1，該菌株能在油菜內(nèi)進(jìn)行內(nèi)生性生長(zhǎng)，同時(shí)還涉及一種生防菌擬康寧木霉ReTk1菌劑的制備方法，還涉及一種擬康寧木霉ReTk1菌株在制備治療或預(yù)防油菜等十字花科植物根腫病藥物中的應(yīng)用。 可用于油菜等十字花科植物根腫病的生物防控。 轉(zhuǎn)化條件：所需資金小，有大型固體發(fā)酵條件，能進(jìn)行大量發(fā)酵產(chǎn)生分生孢子并進(jìn)行孢子的收集分裝等即可。 成果完成時(shí)間：2014年

本項(xiàng)目首先借助比較蛋白組學(xué)研究技術(shù)，從細(xì)胞內(nèi)異亮氨酸合成及轉(zhuǎn)運(yùn)的整體網(wǎng)絡(luò)入手，揭示其中影響氨基酸胞外積累的若干關(guān)鍵蛋白質(zhì)，研究氨基酸合成及轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝調(diào)控、底物利用、細(xì)胞通透等相關(guān)蛋白質(zhì)的作用機(jī)制。然后采用系統(tǒng)生物學(xué)和代謝工程研究手段，利用啟動(dòng)子改造、基因共表達(dá)、酶定向進(jìn)化等技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)改造，以顯著提高乳糖發(fā)酵短桿菌支鏈氨基酸生產(chǎn)水平。比較蛋白組學(xué)分析將為支鏈氨基酸高產(chǎn)機(jī)理研究奠定堅(jiān)實(shí)理論基礎(chǔ)，乳糖發(fā)酵短桿菌代謝工程系統(tǒng)改造為工業(yè)化應(yīng)用提供有力技術(shù)支撐。 關(guān)鍵技術(shù) L-異亮氨酸是人體 8 種必需氨基酸之一，因其具特殊的結(jié)構(gòu)和功能，其用量逐年增長(zhǎng)，目前國(guó)際上日本生產(chǎn) L-異亮氨酸且占?jí)艛嗟匚唬瑥S家有味之素、協(xié)和發(fā)酵和田邊制藥三家，均已發(fā)酵法生產(chǎn)，產(chǎn)率達(dá) 30-35 g/L，提取率 60-70%，我國(guó)的異亮氨酸研究起步晚，目前分批發(fā)酵大罐產(chǎn)酸率為 20-22g/L，總得率為 40- 50%，與日本相比較，我國(guó)的 L-異亮氨酸生產(chǎn)水平還很低下，主要是由于生產(chǎn)菌株絕大多數(shù)通過誘變選育獲得，少數(shù)菌株利用基因工程手段改造，但僅局限于少數(shù)合成酶基因，這嚴(yán)重制約了支鏈氨基酸產(chǎn)率的進(jìn)一步提高。本成果克服了行業(yè)內(nèi)的菌株瓶頸，并優(yōu)化獲得了工業(yè)發(fā)酵工藝。

本項(xiàng)目分別從乳酸菌和大腸桿菌出發(fā)，通過基因工程和代謝工程改造菌株，并優(yōu)化菌株發(fā)酵條件和發(fā)酵策略，提高了生物合成 GABA 的產(chǎn)量和生產(chǎn)效率, 1 L以玉米芯水解液為碳源的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)的 L. buchneri WPZ001 細(xì)胞通過靜置發(fā)酵和靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化累計(jì)可得到 GABA 117 g。主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)結(jié)論如下：發(fā)現(xiàn) L. buchneri WPZ001 可利用木糖或玉米芯水解液為碳源生長(zhǎng)并通過靜置發(fā)酵高產(chǎn) GABA；發(fā)現(xiàn) E. coli BL21(DE3)/pET20b-torA-gadB 在信號(hào)肽 TorA 引導(dǎo)下可有效分泌表達(dá) GadB 并可用于高效生產(chǎn) GABA；發(fā)現(xiàn)在大腸桿菌中表達(dá) Weimberg 途徑可將木糖合成 GABA 的精簡(jiǎn)為 7 步反應(yīng)；E. coli JWZ08/pWZt7-g3/pWZt7-xyl 以木糖直接合成 GABA 產(chǎn)量是此前葡萄糖直接合成 GABA 的報(bào)道的 3 倍。 

鹽堿、干旱、高溫、凍害和洪澇等逆境脅迫嚴(yán)重影響作物的正常生長(zhǎng)發(fā)育，是造成農(nóng)作物減產(chǎn)和品質(zhì)下降的主要原因之一，嚴(yán)重影響農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。另一方面，對(duì)于糧食作物和多數(shù)經(jīng)濟(jì)作物來(lái)說，其功能葉片中的同化產(chǎn)物和衰老葉片中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不斷向產(chǎn)量器官的轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)作物產(chǎn)量和品質(zhì)性狀的形成具有重要的作用，作物的過早衰老不僅直接影響糧食作物的產(chǎn)量和品質(zhì)等要素，對(duì)于綠葉類作物和觀賞花卉還會(huì)影響到其貨架壽命以及觀賞價(jià)值等。 克隆葉片衰老和逆境抗性相關(guān)基因，并利用生物工程技術(shù)調(diào)控其在主要經(jīng)濟(jì)作物中的表達(dá)方式和表達(dá)水平，是提高和穩(wěn)定作物產(chǎn)量、改善作物品質(zhì)性狀的有效手段，具有重大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。然而，很多衰老或逆境抗性相關(guān)基因在植物細(xì)胞中高表達(dá)后，在增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因植株對(duì)特定脅迫的抗性、延緩植株衰老的同時(shí)，往往伴隨著對(duì)植株正常生長(zhǎng)和發(fā)育的不利影響，如導(dǎo)致植株矮小、生長(zhǎng)遲緩或產(chǎn)量下降等，導(dǎo)致該基因無(wú)法直接應(yīng)用于抗逆作物的培育。如果可以特異性地表達(dá)這些基因，讓它們?cè)谔囟ǖ陌l(fā)育階段或脅迫條件下高表達(dá)，而在正常的生長(zhǎng)過程中維持在較低的基礎(chǔ)水平，可以大大提高它們?cè)诨蚬こ讨械膽?yīng)用性。 課題組前期克隆了一個(gè)植物葉片衰老的負(fù)調(diào)控因子。在轉(zhuǎn)基因植物中過表達(dá)該基因可以顯著延緩植物的衰老，并賦予植物對(duì)高鹽、干旱等脅迫的抗性，但是，轉(zhuǎn)基因植物的生長(zhǎng)發(fā)育受到明顯抑制，導(dǎo)致該基因無(wú)法被直接應(yīng)用于抗逆作物的育種工作。課題組前期還分離鑒定了一段含有 14 個(gè)氨基酸的多肽序列，命名為 WX01。我們對(duì) WX01的功能研究發(fā)現(xiàn)其包含獨(dú)特的蛋白降解信號(hào)，能夠響應(yīng)發(fā)育與環(huán)境信號(hào)，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控與它融合的目的蛋白的穩(wěn)定性，從而使目的蛋白在光下正常旺盛生長(zhǎng)的植株中降解、但在啟動(dòng)衰老或者高鹽、高溫和失水等多種逆境脅迫條件下特異積累。我們利用 WX01 與前述衰老負(fù)調(diào)節(jié)因子構(gòu)建了融合基因 WX02，并轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥中，發(fā)現(xiàn)該融合基因可以恢復(fù)衰老負(fù)調(diào)節(jié)因子積累造成的植株矮小、生長(zhǎng)抑制的表型，但是保留了其延緩衰老、促進(jìn)光合和提高轉(zhuǎn)基因植物對(duì)高鹽、干旱等逆境脅迫的抗性的功能。課題組進(jìn)一步將 WX02 融合基因轉(zhuǎn)入經(jīng)濟(jì)作物大豆中進(jìn)行功能驗(yàn)證，獲得了可穩(wěn)定遺傳的多個(gè)株系單拷貝純合轉(zhuǎn)基因大豆材料。對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆的表型分析同樣證明，WX02 轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)高鹽、干旱脅迫的抗性顯著提高。上述研究結(jié)果表明 WX02 融合基因在抗逆轉(zhuǎn)基因作物新品種培育中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。圍繞該項(xiàng)目已經(jīng)申請(qǐng)了 2 項(xiàng)國(guó)家發(fā)明專利，1 項(xiàng)國(guó)際 PCT 專利，其中 1 項(xiàng)國(guó)家發(fā)明專利已經(jīng)獲得授權(quán)。 

本發(fā)明公開了一種抗龍卷風(fēng)格柵設(shè)計(jì)方法，首先確定格柵豎直高度H，實(shí)際需求的格柵通風(fēng)面積A，與框架前側(cè)橫向連接桿連接的平面板的寬度l1，擋板的厚度t，然后選取擋板中間的彎折角，確定格柵中擋板的層數(shù)n，上下相鄰兩塊擋板彎折角頂點(diǎn)之間的距離h，最后計(jì)算格柵的水平厚度W，確定抗龍卷風(fēng)格柵的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)的框架和連接桿件主要起到保持整體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的作用，擋板則用來(lái)提供通風(fēng)面積與對(duì)內(nèi)部的防護(hù)作用，經(jīng)過實(shí)際驗(yàn)證具有非常好的通風(fēng)和防護(hù)性能，對(duì)于核電站等相關(guān)設(shè)施具有十分主要的意義。