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本發(fā)明公開(kāi)了一種蠟樣芽孢桿菌、其篩選方法、制劑及應(yīng)用。所述蠟樣芽孢桿菌，具有高效土霉素降解能力，按照如下方法篩選：(1)取受土霉素污染的豬糞菌懸液，在含有 400μg/ml 至 500μg/ml 的放線菌酮的培養(yǎng)基中培養(yǎng)出細(xì)菌單菌落；(2)不斷提高培養(yǎng)基中土霉素的濃度，保留能適應(yīng)的細(xì)菌單菌落；(3)將上述細(xì)菌單菌落，加入無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)，不斷提高土霉素濃度，保藏土霉素降解率不低于 50％且 OD600 不低于 0.2 的細(xì)菌。所述制劑包括質(zhì)量比例為 1：4 至 1：5的所述芽孢桿菌干粉和有機(jī)基質(zhì)。所

1.痛點(diǎn)問(wèn)題 表面活性素是一種枯草芽孢桿菌脂肽，分子結(jié)構(gòu)含7個(gè)氨基酸環(huán)肽及13-16個(gè)碳鏈長(zhǎng)度的脂肪酸，作為脂肽家族生物表面活性劑的代表性分子，具有優(yōu)異的表面/界面活性、穩(wěn)定性及抑菌、殺蟲(chóng)等性能。因此，其在石油開(kāi)采、工農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、日化等領(lǐng)域展現(xiàn)出了非常廣闊的應(yīng)用前景。 但發(fā)酵產(chǎn)率低嚴(yán)重制約了表面活性素的工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用。研究表明，野生菌株的產(chǎn)量通常為1g/L以下。培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化后，產(chǎn)量提高也很有限。菌株的基因工程改造方面也比較困難。表面活性素（脂肽）合成機(jī)制為特殊的非核糖體肽合成機(jī)制，基因簇很大，長(zhǎng)度達(dá)到26Kb以上。因此很難實(shí)現(xiàn)異源表達(dá)，只能進(jìn)行基因組原位突變改造。其分子結(jié)構(gòu)中既包含氨基酸、也包括脂肪酸，因此代謝途徑也很復(fù)雜。此外，發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，嚴(yán)重的起泡和泡沫溢出問(wèn)題也制約了工業(yè)化的進(jìn)程。 2.解決方案 化工系于慧敏教授團(tuán)隊(duì)從南海底泥等特殊環(huán)境中篩選獲得了產(chǎn)表面活性素野生枯草芽孢桿菌，進(jìn)一步采用原位編輯超強(qiáng)啟動(dòng)子工程、特點(diǎn)氨基酸和脂肪酸代謝工程和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞-芽孢調(diào)控綜合策略，成功構(gòu)建高產(chǎn)表面活性素的無(wú)休眠枯草芽孢桿菌超級(jí)細(xì)胞工廠，并進(jìn)一步打通了高產(chǎn)表面活性素新工藝，獲得了表面活性素液體和粉末產(chǎn)品。 3.合作需求 本項(xiàng)目尋求有志于在石油開(kāi)采、工農(nóng)業(yè)、日化洗滌等不同應(yīng)用領(lǐng)域進(jìn)行脂肽（表面活性素）新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的企業(yè)開(kāi)展合作，尤其是在上述不同領(lǐng)域具有孵化資源或資金，在工程化、產(chǎn)品化所需的場(chǎng)地、實(shí)驗(yàn)條件等方面具有生產(chǎn)和銷售優(yōu)勢(shì)或經(jīng)驗(yàn)的企業(yè)。也尋求對(duì)不同應(yīng)用場(chǎng)景具有共同開(kāi)發(fā)興趣的企業(yè)開(kāi)展技術(shù)合作。最后，也希望與一些高科技園區(qū)進(jìn)行對(duì)接，推動(dòng)產(chǎn)品生產(chǎn)線建設(shè)。

中試階段/n該成果屬于獸用微生物添加劑制備技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，涉及一株緩解畜禽應(yīng)激的枯草芽孢桿菌選育及應(yīng)用。該發(fā)明從禽源分離篩選的對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物常見(jiàn)腸道致病菌如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門(mén)氏菌具有明顯的抑菌效果的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）HDRaBS1。生物功能驗(yàn)證表明該菌株具有抗逆性強(qiáng)和抗應(yīng)激等特點(diǎn)，可用于制備抗畜禽應(yīng)激的微生物制劑，其中的制劑包括畜禽飼用微生物添加劑。還公開(kāi)了該枯草芽孢桿菌HDRaBS1的分離鑒定方法及其在畜禽用單菌劑制備中的應(yīng)用。

胞內(nèi)寄生性單增李斯特菌和綿羊李斯特菌能在吞噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)繁殖，引發(fā)高水平的抗原遞呈作用，分別通過(guò)MHCⅠ和Ⅱ類途徑引起宿主抗原特異性的CD8+和CD4+ T細(xì)胞免疫反應(yīng)，建立長(zhǎng)期有效的免疫保護(hù)記憶，因此可作為一種通用的疫苗載體。本項(xiàng)目以上述兩種李斯特菌為活菌載體搭建新型疫苗構(gòu)建通用平臺(tái)，該平臺(tái)具有以下優(yōu)勢(shì)：生物安全——敲除了菌株致病基因，降低了毒性；外源蛋白表達(dá)穩(wěn)定——外源抗原基因整合至細(xì)菌基因組，永遠(yuǎn)不會(huì)丟失；外源抗原具有分泌性——抗原基因融合有分泌信號(hào)肽，使蛋白能分泌到胞外，更有利于免疫刺激；對(duì)環(huán)境、公共健康安全——重組疫苗菌株不攜帶耐藥基因，不會(huì)給環(huán)境和公共健康帶來(lái)危害。本平臺(tái)技術(shù)目前已獲得授權(quán)專利，成果屬于國(guó)際先進(jìn)水平，已在結(jié)核疫苗及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的研制上應(yīng)用。該平臺(tái)還可應(yīng)用于腫瘤治療性疫苗及其他預(yù)防病毒和慢性細(xì)菌感染的疫苗的研發(fā)，是一種通用的疫苗構(gòu)建平臺(tái)。

從寒假到現(xiàn)在，清華大學(xué)天津高端裝備研究院表界面微納技術(shù)研究所（以下簡(jiǎn)稱清華高端院表界面所）的實(shí)驗(yàn)室里，科研人員已連續(xù)忙碌了好多天。為了趕制捐獻(xiàn)給抗疫醫(yī)務(wù)人員的消毒除菌凝膠，留在天津的研究所員工幾乎全部上崗。由于生產(chǎn)線工人沒(méi)有復(fù)工，這些科研工作者們就成了“臨時(shí)工”，實(shí)驗(yàn)室成了“臨時(shí)生產(chǎn)線”。“相比傳統(tǒng)噴灑消毒液的方式，緩釋二氧化氯可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期持續(xù)消毒，無(wú)死角覆蓋，是一種更好的消毒方式。”清華高端院表界面所常務(wù)副所長(zhǎng)杜川說(shuō)。在北京清華長(zhǎng)庚醫(yī)院執(zhí)行院長(zhǎng)董家鴻院士的建議下，大年初二，高端院應(yīng)急專項(xiàng)小組緊急集結(jié)，針對(duì)除菌消毒的應(yīng)用需求，在之前技術(shù)儲(chǔ)備的基礎(chǔ)上，以最快的速度研發(fā)出以緩釋二氧化氯技術(shù)為核心的消毒除菌凝膠，為這場(chǎng)特殊戰(zhàn)“疫”提供綠色、安全、長(zhǎng)期高效的消毒除菌新手段。經(jīng)廣東省微生物分析檢測(cè)中心檢測(cè)，殺菌率達(dá)到99.9%。一瓶消毒除菌凝膠可以在10—20平方米的房間使用1—2個(gè)月，而且其揮發(fā)濃度僅為美國(guó)國(guó)家職業(yè)安全衛(wèi)生協(xié)會(huì)建議暴露限值0.1ppm濃度（parts per million）的三分之一，在保證消殺效果的同時(shí)，不會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生影響。

該技術(shù)利用不同食用菌子實(shí)體或加工副產(chǎn)物，制作不同功效的食用菌系列 凍干方便菌湯，適用于食品加工企業(yè)、凍干食品加工企業(yè)、果蔬加工企業(yè)。解 決了生鮮果、菜、菌加工副產(chǎn)物綜合高效利用問(wèn)題；將生鮮果、菜、菌的營(yíng)養(yǎng) 與保健功效與糕點(diǎn)、面點(diǎn)相結(jié)合，改善和提高了普通糕點(diǎn)及面食制品的營(yíng)養(yǎng)與 功能；增加了糕點(diǎn)及面食制品的花色品種，以滿足消費(fèi)者的多樣化需求。該技 術(shù)可直接對(duì)生鮮果、菜、菌加工副產(chǎn)物進(jìn)行濕法打漿利用，省去了脫水干燥與 粉碎工序，簡(jiǎn)化了工藝流程，降低了加工能耗。通過(guò)打發(fā)順序的調(diào)整和有關(guān)配 料的應(yīng)用，提高了制品的性能，保護(hù)了原料中的營(yíng)養(yǎng)與功效成分。

本實(shí)用新型涉及一種乳酸菌復(fù)合菌劑的制備裝置，包括外箱體，外箱體頂部設(shè)置有蒸汽接口，外箱體內(nèi)上部設(shè)置有上端開(kāi)口的原料箱，原料箱通過(guò)管道連接有位于其下方的混合箱，混合箱兩端均通過(guò)轉(zhuǎn)軸轉(zhuǎn)動(dòng)固定在固定板上，混合箱底部設(shè)置有凸輪，凸輪連接有位于外箱體外的驅(qū)動(dòng)裝置，混合箱通過(guò)管道連接有菌種箱和培養(yǎng)箱，菌種箱通過(guò)管道與培養(yǎng)箱相連，菌種箱連接有伸出外箱體外的接種管，培養(yǎng)箱底部設(shè)置有加熱裝置，加熱裝置與控制器相連；本實(shí)用新型通過(guò)將原料箱、混合箱、菌種箱和培養(yǎng)箱均設(shè)置在外箱體內(nèi)，方便進(jìn)行蒸汽滅菌消毒，保證培養(yǎng)過(guò)程中的無(wú)菌無(wú)氧環(huán)境，凸輪驅(qū)動(dòng)混合箱搖晃，避免傳統(tǒng)攪拌葉污染培養(yǎng)液的隱患。

本項(xiàng)目涉及功能性醋酸菌/乳酸菌及其發(fā)酵調(diào)控技術(shù)，可用于果蔬飲品、酵素、新型調(diào)味品的發(fā)酵制造。水果、蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品由于其保質(zhì)期短，運(yùn)輸成本高，較適宜于在原產(chǎn)地或產(chǎn)地附近進(jìn)行深加工，以延長(zhǎng)保質(zhì)期及產(chǎn)品附加值。發(fā)酵類果蔬飲品由于經(jīng)過(guò)微生物處理，在口味、質(zhì)地以及營(yíng)養(yǎng)成分等方面均得到了顯著改善，其中果蔬類益生菌類發(fā)酵飲品，更是得到關(guān)注健康的消費(fèi)人群的青睞。然而目前市場(chǎng)中的發(fā)酵果蔬汁類產(chǎn)品，魚(yú)龍混雜，很多產(chǎn)品存在發(fā)酵程度不高；高度依賴后調(diào)配；微生物混亂及發(fā)酵過(guò)程控制不科學(xué)；食品安全性不能得到保障等問(wèn)題。 針對(duì)這一類型的產(chǎn)品，本項(xiàng)目從發(fā)酵菌種、發(fā)酵工藝、功能成分分析以及產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化等方面系統(tǒng)的進(jìn)行了研發(fā)。 1）豐富的菌種：本課題組擁有近百株背景明確、安全可靠、發(fā)酵性能優(yōu)良 的微生物，形成了完備的釀造用菌種庫(kù)，包括乳酸菌、醋酸菌、酵母菌、米曲霉等。可以針對(duì)不同的發(fā)酵原料以及最終產(chǎn)品口感及質(zhì)構(gòu)的要求，選擇一種益生菌或復(fù)合發(fā)酵菌種，實(shí)現(xiàn)個(gè)性化的定制需求。 2）科學(xué)工藝：通過(guò)科學(xué)的發(fā)酵工藝及過(guò)程控制，實(shí)現(xiàn)了乳酸菌等微生物的高密度培養(yǎng)，活菌數(shù)可達(dá) 100 億/ml。大幅降低生產(chǎn)成本和周期，混菌發(fā)酵可由幾個(gè)月縮短至 10 天內(nèi)，乳酸菌發(fā)酵縮短至 24 小時(shí)內(nèi)。實(shí)現(xiàn)高效的物質(zhì)轉(zhuǎn)化，總酸可以達(dá)到 6%，提高產(chǎn)品品質(zhì)及生產(chǎn)穩(wěn)定性。 3）成分分析：建立了完備的發(fā)酵產(chǎn)品成分分析技術(shù)平臺(tái)。針對(duì)與產(chǎn)品風(fēng)味、以及腸道調(diào)節(jié)、增強(qiáng)免疫等健康功能緊密相關(guān)的有機(jī)酸、短鏈脂肪酸、多酚、多肽等功能成分進(jìn)行精確定量分析以及健康功能評(píng)價(jià)。 4）產(chǎn)品風(fēng)味: 本課題組研發(fā)的果蔬發(fā)酵產(chǎn)品口味濃郁、發(fā)酵特色明顯，無(wú)不良異味。避免了發(fā)酵后的過(guò)度調(diào)配及添加劑的使用，即可達(dá)到較優(yōu)的感官要求。符合健康、綠色的現(xiàn)代加工食品的需求。 

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中許多病害發(fā)生、發(fā)展嚴(yán)重，目前在生產(chǎn)中仍以化學(xué)防治為主，由于田間化學(xué)用藥次數(shù)的提高，病菌已產(chǎn)生明顯的抗藥性。如番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)侵染引起的，是番茄生產(chǎn)中的主要病害，嚴(yán)重影響番茄的產(chǎn)量及品質(zhì)。由于缺乏抗灰霉病的抗原材料，通過(guò)常規(guī)方法很難育成番茄灰霉病的抗性品種。傳統(tǒng)的化學(xué)防治不僅高殘留、高污染，且對(duì)葉圍有益微生物區(qū)系造成破壞，自然抗病能力進(jìn)一步減弱。隨著人們生活水平的提高，對(duì)番茄等果蔬產(chǎn)品的品質(zhì)要求越來(lái)越高，綠色和有機(jī)食品逐漸成為消費(fèi)市場(chǎng)的主流，市場(chǎng)潛力巨大。在食品安全、環(huán)境保護(hù)、農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的時(shí)代潮流下，研發(fā)新型生物農(nóng)藥逐步取代化學(xué)農(nóng)藥已成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要目標(biāo)，也是經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展的必然趨勢(shì)。 利用生防微生物及其次生代謝產(chǎn)物是生物防治的重要手段，我國(guó)和世界上許多國(guó)家已有商品化微生物農(nóng)藥產(chǎn)品。目前對(duì)于番茄灰霉病的微生物防治研究多數(shù)處于實(shí)驗(yàn)室和溫室階段，田間應(yīng)用的極少，多數(shù)菌劑在田間應(yīng)用過(guò)程中防效不穩(wěn)，這是制約微生物菌劑開(kāi)發(fā)應(yīng)用的一個(gè)瓶頸。此外，多數(shù)研究只是針對(duì)某一種病害，具有廣譜抗性的菌株很少。本實(shí)驗(yàn)室在土壤中分離出一株新的粉紅粘帚菌（WY-1），初步研究表明，該菌對(duì)番茄灰霉病、葉霉病、枯萎病、黃萎病和綿疫病等病原菌均有抑制作用（已獲專利，專利號(hào)ZL2009 1 0072862.4）該菌株是可通過(guò)多種機(jī)制共同作用抑制數(shù)種植物病原菌的生防菌，能有效的防治番茄、辣椒等多種作物的灰霉病、葉霉病、枯萎病、黃萎病和綿疫病等，同時(shí)具有較好的促生作用，具有一菌多效的特點(diǎn)。其作用機(jī)制包括競(jìng)爭(zhēng)、重寄生、溶菌、拮抗和誘導(dǎo)抗性等。由于該生物制劑是一種廣譜抗性的生防菌劑，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有重要的社會(huì)意義。這種以防治番茄灰霉病為主的廣譜性生防菌劑，可以有效的控制保護(hù)地生產(chǎn)病害的發(fā)生，在滿足菜籃子需求的基礎(chǔ)上，更保證了有機(jī)蔬菜的安全生產(chǎn)。

已有樣品/n公開(kāi)了一種蘇云金芽孢桿菌及制備方法和應(yīng)用，保藏編號(hào)：CCTCCM2012040。其步驟是:A、利用土壤中蘇云金芽孢桿菌芽孢耐78－82℃高溫以及形成伴胞晶體的特性，采用彈土法分離蘇云金芽孢桿菌；B、以初孵甜菜夜蛾和棉鈴蟲(chóng)為試蟲(chóng)，進(jìn)行毒力生物測(cè)定，經(jīng)過(guò)比較毒力致死中量LC50，篩選到高毒力菌株BtCS36。利用正交試驗(yàn)和小試發(fā)酵，確定了其發(fā)酵培養(yǎng)基配方和發(fā)酵工藝。利用該菌和確定的發(fā)酵工藝發(fā)酵周期為30小時(shí)左右，發(fā)酵液對(duì)棉鈴蟲(chóng)的毒力效價(jià)達(dá)3000-5000IU/μl。生產(chǎn)新型Bt殺蟲(chóng)劑不僅可