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研發(fā)階段/n基于基因組定點編輯分子育種新技術及其配套軟件。　　成果簡介：本成果含有完整的基于CRISPR/Cas系統(tǒng)介導的基因組定點編輯技術，我們對基因組編輯技術切割活性和脫靶效應進行了優(yōu)化，開發(fā)了完整的sgRNA設計，sgRNA表達載體構建，細胞或在體水平基因組打靶和脫靶檢測等技術。提高基因組定點打靶效率和降低脫靶風險，為基因組定點編輯技術應用于動植物分子育種打開了新的局面。本成果擁有自主知識產權的基因組編輯技術配套軟件，其適用于針對不同物種基因組設計和篩選活性高，特異性強的sgRNA用于動植物分

全面開發(fā)了生脈散抑制 ras 原癌基因過表達中 的新用途，具體涉及在制備抑制 ras 原癌基因過表達的抗腫瘤藥物中的應用。

本研究的對象為來自海洋真菌代謝產物的命名為Xyloketals的系列化合物，其結構新穎，體內實驗表明 Xyloketal B有突出的防治動脈粥樣硬化的作用，與陽性藥辛伐他汀相比其作用更明顯，同時表明Xyloketal B 具有降壓、逆轉心肌肥厚的療效，在抗動脈粥樣硬化作用的同時具有保護靶器官的作用，相對于目前臨床 用藥更有優(yōu)越之處。 在作用機制的研究中發(fā)現(xiàn)本化合物具有極強的抗氧化應激、調控鈣內流、促NO生成、保護血管內皮 損傷和抗缺血缺氧特性。急性毒理學實驗發(fā)現(xiàn)xyloketal B毒性非常低，給小鼠單次口服、靜脈注射或腹腔 注射給藥，Xyloketal B的最大耐受劑量>1.4g/Kg(該劑量為降壓及抗心肌肥厚治療劑量的100倍)，極有可能發(fā) 要的作用。因此，防止血小板粘附聚集功能已經成為防治動脈粥樣硬化性疾病和血栓性疾病的重要靶標之 展成為突出的防治心腦血管疾病的藥物。 一。三七屬于五加科植物，是我國一味傳統(tǒng)中藥。三七具有活血化瘀、消腫定痛的功能。研究已證實三七 皂苷是其發(fā)揮一系列功能的主要活性成分。我們本次研究成果發(fā)現(xiàn)，三七皂苷Rb2和Rd2可以抑制血小板 活化、粘附和聚集功能，

【發(fā) 明 人】郭立瑋；楊進；卞慧敏；龔婕寧；劉陶世【技術領域】本發(fā)明涉及一種治療呼吸系統(tǒng)病毒感染性疾病的中藥制劑，屬中藥領域?！菊勘景l(fā)明涉及一種治療呼吸系統(tǒng)病毒感染性疾病的中藥制劑，由原料藥金銀花1-12重量份，白僵蠶1-6重量份，蟬蛻1-6重量份，生地1-12重量份，黃芩1-6重量份，黃連1-6重量份，黃柏1-6重量份制成，配伍藥物上可接受的輔料，制成糖漿劑、顆粒劑、膠囊劑、軟膠囊劑或片劑等各種口服劑型。本中藥運用中醫(yī)學“扶正祛邪”和“養(yǎng)陰托邪”理論組方而成，體現(xiàn)了“祛邪務早、透邪外解和預護其虛”的指導思想；對人體免疫功能具有明顯調節(jié)作用，能促進淋轉，增加抗體，增加淋巴細胞DNA合成和IL-2的產生，同時又有類似腎上腺皮質繳素的作用，對許多病毒性疾病初起時免疫功能抑制的病理有很好的作用。

本成果屬于很少見的彌足寶貴的“腦心同治”的發(fā)明專利。心腦血管疾病和癌癥一直是人類健康的第一大殺手，患病人群與死亡率都居高不下，一直是各國藥企追逐的熱點，也是我國廠家企盼的品種。但縱觀我國所開發(fā)的相關品種，單治腦血管或單治心血管的多，而“腦心同治”的品種極少。然而，在臨床就診的腦血管與心血管疾病患者中，腦血管病和心血管病兼有是臨床十分常見的癥狀，二者亦相互影響，并且互為誘因。因此，開發(fā)對腦血管病和心血管病同時產生效應的藥物非常必要。 二是本成果避免了其他中西品種都具有的較嚴重毒副作用。目前，針對腦血管和心血管疾病，西醫(yī)多采用強心、利尿及擴張血管等藥物治療，但這類藥物長期使用會對人體帶來嚴重的毒副作用，如以硝酸甘油為代表的硝酸甘油類制劑為目前心血管疾病常用藥，但是此類藥物具有較大的副作用，例如出現(xiàn)頭痛、面紅、耳鳴、眩暈、血壓下降、心動過速等，長期使用會產生耐藥性，另外青光眼、腦出血、顱內高壓患者必須忌用。 那么，現(xiàn)有的中成藥品種有沒有副作用呢？當然也有。在臨床上也已有一些治療腦血管或治療心血管疾病的中成藥，但其中很多都屬于“救急”的品種。很多“救急”的藥物，都有較嚴重的毒副作用，西藥最甚，中成藥也不例外，只可用于“救急”，而不宜長久服用，然而所有患者卻都需長期服藥，其中絕大多數(shù)患者還需終身服藥。如治療冠心病的冠心蘇合丸即含有乳香、冰片、青木香、檀香、蘇合香油等成分；另一品種復方丹參片也含有冰片等。這些芳香藥成分很耗傷人體氣血津液，久服對病情反而不利。但是，我們合作的品種（專利）卻幾乎沒有任何毒副作用。同時，腦血管與心血管疾病在急救之后，需要繼續(xù)采取有效的治療，并且，在“救急”之后就必須盡快跟進的繼續(xù)治療，才是最重要的、治本的治療，而在臨床上，恰恰西藥缺乏這方面的有效品種，而相關的中成藥也不常見，特別是同時治療腦血管與心血管疾病的中成藥和西藥更是嚴重缺乏（我們的專利品種則是適于馬上跟進繼續(xù)治療，可長期服用的“長效品種”）。 三是本成果具有較好的臨床療效。當然，“療效”并不等同于“治愈”，這一點須首先要說清楚。本成果（專利）中組方的很多藥味，大多是經過多年臨床反復驗證過對“腦心血管病”卓有療效的品種（但其中水蛭必須用吸血水蛭，否則便沒有療效——水蛭專家多次試驗證明只有吸血水蛭才含有有效成分）。

本發(fā)明提供了一種檢測牛APAF1基因隱性致死突變的方法，涉及分子生物學領域，本發(fā)明方法基于焦磷酸測序技術，采用一對擴增引物、一條通用引物和一條測序引物，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1、2、3、4所示，對牛5號染色體63150400bp位點的單核苷酸多態(tài)性進行分析，結果發(fā)現(xiàn)牛APAF1基因野生型純合子在C堿基處有峰，T堿基處無峰；而致死突變攜帶者在C堿基與T堿基處均有峰。本發(fā)明提供的方法操作簡單，靈敏度高，準確性強，通量高，檢測成本低，可快速檢測APAF1基因隱性致死突變攜帶者的個體，在牛的育種過程中具有重要應用價值。

本發(fā)明公開了蛋白質nog1在調控植物產量和/或穗粒數(shù)中的應用。所述蛋白質nog1為氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質；所述產量為單株產量；所述穗粒數(shù)為主莖穗粒數(shù)。實驗證明，向Guichao 2中導入抑制所述蛋白質nog1表達的物質，得到轉基因植物乙；與Guichao 2相比，轉基因植物乙的單株產量減少和/或主莖穗粒數(shù)減少。將編碼蛋白質nog1的核酸分子導入SIL176中，得到轉基因植物甲；與SIL176相比，轉基因植物甲的單株產量增加和/或主莖穗粒數(shù)增加。因此，蛋白質nog1對調控水稻產量和穗粒數(shù)具有非常重要的作用。

項目成果/簡介:本發(fā)明提供茶樹咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP及其在制備轉基因植物中的應用.本發(fā)明以茶樹DNA為模板,用GenomeWalking方法克隆得到茶樹TCS基因啟動子序列,然后利用Gateway技術構建重組植物表達載體pKGWFS7TCSP,采用農桿菌介導的煙草遺傳轉化,以表達GUS基因的方式進行啟動子活性功能驗證.本發(fā)明首次從茶樹中克隆出特異性咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP,并驗證了其活性,對于揭示茶樹咖啡堿合成的機理,生物調控茶樹咖啡堿的含量具有重要意義.

高溫、低溫和鹽堿脅迫已成為限制作物生產和植物生長發(fā)育的重要環(huán)境因子。本項目歷時14年，以重要作物棉花和模式植物擬南芥為材料，將基因挖掘、機理探索與利用緊密結合，分離鑒定了多個溫度和高鹽脅迫應答基因、高效特異表達啟動子及基因表達調控元件，探討了其調控機制，為作物遺傳改良提供了新基因資源和理論支撐。①發(fā)現(xiàn)了高溫誘導的miRNA可變剪切新機制，探討了低溫脅迫下GhDREB1與激素的調控關系，為闡明植物應答溫度脅迫的分子機理提供了新證據(jù)。②解析了GhZFP1、GhMT3a和GhNHX1等基因在植物高鹽脅迫適應中通過調節(jié)Na+積累和清除活性氧發(fā)揮作用，為作物抗逆品種改良提供了重要基因資源。③發(fā)掘并鑒定了植物組織特異高效啟動子和調控元件，闡明了核基質結合序列在提高遺傳轉化效率和轉基因表達水平方面的作用，為植物遺傳轉化提供了有效表達載體。本成果在Molecular Cell等國內外學術刊物發(fā)表論文71篇，其中SCI論文62篇；總影響因子235，影響因子5以上論文15篇，單篇最高影響因子15.28，他引總計2227次。高溫誘導的miRNA可變剪切闡明了環(huán)境脅迫與植物miRNA加工的調控關系，是本領域研究的重大發(fā)現(xiàn)，在國內外產生了較大影響，為提升我國在該領域研究的國際影響力發(fā)揮了積極作用。

本發(fā)明提供茶樹咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP及其在制備轉基因植物中的應用.本發(fā)明以茶樹DNA為模板,用GenomeWalking方法克隆得到茶樹TCS基因啟動子序列,然后利用Gateway技術構建重組植物表達載體pKGWFS7TCSP,采用農桿菌介導的煙草遺傳轉化,以表達GUS基因的方式進行啟動子活性功能驗證.本發(fā)明首次從茶樹中克隆出特異性咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP,并驗證了其活性,對于揭示茶樹咖啡堿合成的機理,生物調控茶樹咖啡堿的含量具有重要意義.