本發明公開了一種地衣芽孢桿菌分泌的抗菌肽及其制備方法和應用。所述的抗菌肽氨基酸序列為序列表SEQIDNO.1所示,分子量為1290.4道爾頓,等電點5.23。其制備方法是:硫酸銨沉淀培養基中地衣芽孢桿菌分泌的的抗菌肽,利用陰離子交換、分子篩層析和反向高效液相色譜法純化抗菌肽。該抗菌肽具有顯著的抗菌活性,且不會對豬的紅細胞產生溶血作用,可用于開發制備飼用抗菌藥物。