本發明提供一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法,該方法以一定C鏈長度的直鏈二胺為橋基,在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中,通過二胺兩端的-NH2分別與熒光染料及葉酸上的-COOH基團之間的酰胺反應而實現三者的相連,從而構成熒光染料-二胺-葉酸結構的熒光染料探針。本發明的效果為該方法在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中,添加二胺作為橋基,增加熒光染料和葉酸之間的C鏈長度,減小染料分子和葉酸之間的空間位阻效應,提高葉酸修飾的熒光染料探針合成產率。