本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體的是涉及一種miR-29海綿在制備用于治療2型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
2型糖尿病的病因多樣，最重要的因素包括年齡、性別、肥胖、低運動量和糖尿病家族史等。并且隨著我國老齡化加重，飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，2型糖尿病在我國發(fā)病率居高不下。血脂異常、糖代謝紊亂、胰島功能未完全消失及肥胖是2型糖尿病的典型特點。目前針對2型糖尿病治療暫無特效藥物，傳統(tǒng)治療2型糖尿病藥物雖可暫時緩解患者病情，降低患者血壓，但長期服用易出現(xiàn)低血糖現(xiàn)象，嚴重危害患者的生命安全。

目前治療T2DM的方式包括：降糖藥物治療和代謝手術(shù)治療。其中，降糖藥物包括二甲雙胍、GLP-1受體激動劑、噻唑烷二酮類和DPP-4抑制劑等，這類藥物需長期堅持使用，影響患者的生活質(zhì)量，也會出現(xiàn)較大藥物不良反應(yīng)。胰島素注射也可以有效的降低血糖水平，但是長期的使用并不能滿足代謝的需求，反而加重胰島素抵抗，并且會導(dǎo)致多種并發(fā)癥，例如低血糖、視網(wǎng)膜病、心血管疾病等。減重手術(shù)雖然效果顯著，但是由于創(chuàng)傷較大而僅在極度肥胖的2型糖尿病患者開展。因此，尋找一種治療T2DM的新方法至關(guān)重要。

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)2500多種人類miRNAs，并且每一種的miRNA又能調(diào)控成百上千基因的表達。它是一類進化上高度保守的單鏈非編碼小RNA，可通過靶基因mRNA特異性結(jié)合，導(dǎo)致靶基因的mRNA降解或翻譯受到抑制，是轉(zhuǎn)錄后水平負性調(diào)控基因表達的主要執(zhí)行分子。許多miRNA可與多個靶基因共同形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，進而影響細胞的分化、增殖、調(diào)亡、代謝等多種生物學(xué)過程。其中miR-29家族是小鼠和人類代謝組織中表達最豐富的miRNA之一，該家族由4個具有相同種子序列(AGCACC)的物種組成，位于兩個基因組簇中，miR-29a/b-1位于miR-29a簇中，miR-29b-2/c位于miR-29c簇中。miR-29家族在糖尿病患者肝臟、骨骼肌和脂肪組織中的表達水平增強，與纖維化、糖尿病、惡性腫瘤等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。文獻報道，miR-29敲除小鼠模型提示，miR-29家族參與糖代謝調(diào)控，它可能通過影響胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致肥胖和胰島素抵抗。

本發(fā)明提供一種miR-29sponge，其為miR-29的抑制劑，靶向結(jié)合內(nèi)源性miR-29從而抑制其功能。該miR-29sponge封閉巨噬細胞或者β細胞中miR-29的表達，進一步將其應(yīng)用于制備用于治療2型糖尿病的藥物中的應(yīng)用，以解決2型糖尿病當前治療方法匱乏以及治療成本的問題。
具體地，所述miR-29海綿的核苷酸序列如SEQ No .1所示，具體為：
TAACCGATTTCAGATGGTGCTATATACTAACCGATTTCAGATGGTGCTAACATCAACACTGATTTCAAATGGTGCTATCTTCAAACACTGATTTCAAATGGTGCTATTTTTT。

進一步地，本發(fā)明揭示胰島β細胞分泌的外泌體miR-29是巨噬細胞炎癥因子分泌的始動因素，發(fā)現(xiàn)所述miR-29sponge可以抑制高脂飲食誘導(dǎo)的2型糖尿病發(fā)生。
具體在應(yīng)用時，所述miR-29海綿與表達載體有效連接。所述“有效連接”是指本發(fā)明的miR-29海綿與表達載體的連接使所產(chǎn)生的核酸構(gòu)建體能在細胞或動物體內(nèi)轉(zhuǎn)錄本發(fā)明的miR-29海綿。

本發(fā)明先對小鼠進行輻照清除骨髓，然后通過尾靜脈注射H BLV- mmu- mi R-29sponge或HBLV-mmu-NC-GFP感染的骨髓后，觀察miR-29βTG小鼠代謝表型的改變，提供治療2型糖尿病的新方法。 

有益效果：本發(fā)明通過運用miR-29βTG小鼠模型，輻照后進行骨髓移植。通過對其代謝表型的監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)miR-29可以抑制β細胞的葡萄糖刺激的胰島素分泌(glucose- stimulated insulin secretion，GSIS)功能，通過巨噬細胞誘導(dǎo)的局部炎癥促進外泌體 miR-29釋放加重系統(tǒng)炎癥，從而誘導(dǎo)外周組織胰島素抵抗；而抑制單核細胞/巨噬細胞miR-29的作用可以逆轉(zhuǎn)βTG小鼠的炎癥和糖尿病癥狀。同時，本發(fā)明利用C57BL/6J小鼠，通過胰腺原位注射技術(shù)，導(dǎo)管內(nèi)注射HBLV-mmu-miR-29sponge或HBLV-mmu-NC-GFP并聯(lián)合高脂喂養(yǎng)，通過對其代謝表型的連續(xù)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)miR-29sponge可以有效緩解高脂飲食誘導(dǎo)的糖耐量受損和GSIS功能缺陷。