本發(fā)明公開了一種雙通道熒光光學顯微成像中基于圖像處理的自動對焦方法,包括 S1 獲得生物組織樣本當前冠狀面輪廓,并獲得三個對焦窗口位置;S2 對三個對焦窗口進行掃描,并采集第 i 層生物組織樣本細胞構筑通道的圖像;S3 判斷當前層三個對焦窗口的圖像采集是否完成,若是,則 i=i+1,并進入 S4,若否,則返回 S2;S4 判斷·830·采集層數(shù) i 是否大于預設的閾值,若是,則進入 S5,若否,則返回 S2;