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開發(fā)了一種還原敏感的多功能載體材料，載體的疏水性嵌段包載抗腫瘤光動力藥物Ce6，攜帶NTA基團(tuán)的嵌段則通過NTA和Cas9蛋白末端His標(biāo)簽之間的特異性結(jié)合高效負(fù)載Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物，然后通過靜電組裝在外層引入靶向腫瘤組織的iRGD分子。這樣的載體結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)和藥物聯(lián)合輸送為實(shí)現(xiàn)腫瘤組織特異性的基因編輯和聯(lián)合治療提供了可行性。納米藥物靶向輸送至腫瘤細(xì)胞后，在近紅外光的輻照下，Ce6產(chǎn)生的活性氧使溶酶體破裂，使納米藥物從溶酶體中逃逸出來，NTA和載體聚合物之間的二硫鍵可響應(yīng)胞質(zhì)內(nèi)的谷胱甘肽等還原劑而斷裂，從而將Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物從載體上釋放出來，執(zhí)行基因編輯功能。在正常的組織中，由于沒有近紅外光的輻照，Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物難以從溶酶體中逃逸，無法執(zhí)行基因編輯的功能。通過紅外光輻照和還原敏感設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)了腫瘤組織特異的基因編輯。此外，腫瘤細(xì)胞在受到Ce6所生成活性氧攻擊時，會上調(diào)Nrf2（一種活性氧代謝的關(guān)鍵蛋白）的表達(dá)，提高腫瘤細(xì)胞對活性氧的耐受性。使用靶向Nrf2基因的sgRNA，可以通過聯(lián)合輸送的Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物使Nrf2基因失活，提高腫瘤細(xì)胞對活性氧的敏感性。總而言之，通過多功能載體聯(lián)合輸送Ce6和Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物，一方面實(shí)現(xiàn)了腫瘤特異性的基因編輯，另一方面也實(shí)現(xiàn)了基因編輯和光動力治療的聯(lián)合治療，協(xié)同提高了基因編輯的特異性和治療效果，為基因編輯技術(shù)的發(fā)展提供了一個新的方向。

在基因治療中，載體將治療基因?qū)氚屑?xì)胞，使其與宿主染色體整合為一體或在宿主細(xì)胞中表達(dá)特定蛋白質(zhì)，從而治療因基因異常或缺陷而導(dǎo)致的疾病。因此，基因治療成敗的關(guān)鍵在于基因遞送系統(tǒng)。基因治療市場未來市場空間巨大。據(jù)Clinical Trial數(shù)據(jù)，目前基因藥物以病毒載體為主，約占所有載體的70%，未來病毒載體市場前景十分廣闊。2017年FDA批準(zhǔn)羅氏公司的基于AAV病毒載體的基因療法Luxturna用來治療患有特定遺傳性眼疾的兒童和成人患者。從實(shí)驗(yàn)室簡單的基因過表達(dá)、體外的基因干擾、基因編輯（CRISPR/Cas9）技術(shù) 、CAR-T免疫療法技術(shù)、到腫瘤、神經(jīng)、代謝、眼科、心臟、肝臟、肺等臨床前動物和臨床人體試驗(yàn)的研究，基因病毒載體的應(yīng)用無處不在。我國離世界先進(jìn)水平在技術(shù)上存在巨大差距，基因運(yùn)載工具由于開發(fā)難度大，生產(chǎn)工藝要求高，目前我國和國際先進(jìn)技術(shù)相比還存在非常大的差距，國內(nèi)基因治療藥物的研發(fā)還處于起步階段，還存在巨大的市場需求沒有得到滿足，而目前美國FDA已有批準(zhǔn)的的基因治療藥物收費(fèi)非常高昂。    目前采用病毒載體的基因療法已經(jīng)成功用于血友病，先天性黑矇，脊髓肌肉萎縮癥等單基因疾病的治療。

產(chǎn)品詳細(xì)介紹  由于qPCR是實(shí)時定量檢測致病病原體基因核酸，因此它比化學(xué)發(fā)光、實(shí)時分辨、蛋白芯片等免疫學(xué)方法更具獨(dú)到優(yōu)勢。   基因擴(kuò)增儀實(shí)時熒光定量pcr儀|熒光定量pcr儀價格|abi熒光定量pcr儀|熒光定量pcr|熒光定量pcr原理|實(shí)時熒光定量pcr|熒光定量pcr技術(shù)|熒光定量pcr結(jié)果分析|實(shí)時熒光定量pcr技術(shù)|熒光定量pcr步驟|基因擴(kuò)增儀-實(shí)時熒光定量pcr儀價格原理科研型TC988C（48孔） 產(chǎn)品編號：TC988C   產(chǎn)品規(guī)格：48孔X0.2 產(chǎn)品簡介：由于qPCR是實(shí)時定量檢測致病病原體基因核酸，因此它比化學(xué)發(fā)光、實(shí)時分辨、蛋白芯片等免疫學(xué)方法更具獨(dú)到優(yōu)勢。 產(chǎn)品詳情：僅供科研使用 國際領(lǐng)先水平的TC988型實(shí)時熒光定量PCR儀適用于臨床及科研以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為特征的、以實(shí)時熒光定量檢測分析DNA/RNA為目的的病原體檢測及基因分析。 動物疾病檢測：禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。 食品安全：食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。 科學(xué)研究：醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究。 應(yīng)用行業(yè)：大學(xué)及研究所 技術(shù)原理： 標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性，低溫復(fù)性，適溫延伸的熱循環(huán)，并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律，與模板DNA互補(bǔ)配對的Taqman探針被切斷，熒光素游離于反應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長，通過實(shí)時檢測與之對應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號強(qiáng)度，求得CT值，同時利用數(shù)個已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對照，即可得出待測標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。 技術(shù)參數(shù)： 標(biāo)本載體 0.2ml薄壁PCR離心管 標(biāo)本數(shù)量 標(biāo)本數(shù)量48個，包括4個標(biāo)準(zhǔn)品 試    劑 SYBR Green I，F(xiàn)AM，Tex Red，F(xiàn)ITC等熒光染料，開放式PCR試劑 反應(yīng)體系 10-100μL 建議質(zhì)控 四個陽性標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對照   指標(biāo) 熒光激發(fā)波長 470nm 熒光發(fā)射波長 530nm，640nm，710nm 570nm，605nm 熒光檢測方式 光開關(guān)陣列組合光電倍增管PMT方式? 控溫范圍 4.0℃-99.0℃? 熱蓋溫度 100℃～120℃? 升/降溫速度 ≥4.0℃/S（Max）? 溫度均勻性 ≤±0.3℃? 溫度精確度 ≤±0.3℃? 溫度顯示精度 0.1℃? 檢測范圍 101～1010DNA/RNA copy/ml CT值重復(fù)性誤差 CV≤2.1％?重要 核酸精度相關(guān)系數(shù) R≥0.997?重要   軟件 溫階 1～9 循環(huán) 1～99 保溫時間 1～9999秒     +.3.0.0.0..366999文件 1～9個連接 升級方式 遠(yuǎn)程硬件內(nèi)控軟件升級   系統(tǒng)接口 RS-232C串行接口，雙向數(shù)據(jù) 主機(jī)操作系統(tǒng) Windows2000/XP 產(chǎn)品外形尺寸 50cm× 40cm × 35cm 產(chǎn)品重量 25kg 使用環(huán)境 溫度5～40℃，相對濕度≤80％ 使用電源 AC220 × （1±10%）V,50 × （1±2%）HZ 功耗 1100VA   多規(guī)格 提供96孔，多通道/多色、36孔等不同規(guī)格產(chǎn)品 產(chǎn)品特點(diǎn)： 專利技術(shù)應(yīng)用實(shí)現(xiàn)快速高效均衡擴(kuò)增檢測由光開關(guān)陣列、自聚焦透鏡和尾纖準(zhǔn)直器及變增益微光O/E裝置組成的MEMS有機(jī)整體，在以16位單片機(jī)為核心的電控裝置管理下，能在毫秒級時間內(nèi)完成多個標(biāo)本快速均衡掃描檢測，避免了機(jī)械掃描方式或CCD掃描方式引起的時間滯后或漸暈誤差。實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)樣本的PCR熱循環(huán)擴(kuò)增及高通量實(shí)時熒光激發(fā)和定量檢測。  1.走在PCR技術(shù)的前列 在PCR儀研發(fā)和市場化領(lǐng)域中歷史悠久； 將標(biāo)準(zhǔn)化的PCR檢測技術(shù)成功廣泛用于臨床；  2.快速實(shí)時PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)了DNA/mRNA檢測的快速性 實(shí)時檢測啟用熒光探針標(biāo)記特定核酸的93 方法使準(zhǔn)確性更高； 簡化了傳統(tǒng)PCR方法； 使用最少的樣本量，在一小時左右出結(jié)果； 3.簡便閉管分析使您完成加樣后就無須再接觸樣本 減少樣本消耗殆盡風(fēng)險； 縮短了出報(bào)告時間； 簡化了試驗(yàn)步驟； 4.提高了用戶高級應(yīng)用的靈活性 提供了用戶自定義PCR操作平臺； 建立您的用戶自定義應(yīng)用； 分析用戶自定義試驗(yàn)； 相關(guān)鏈接：http://www.tocan.cn/index.php?do=product&CategoryID=1004   詳情請鏈接網(wǎng)址：www.tocan.cn聯(lián)系電話：021-51863860、18917331948   聯(lián)系QQ：278622785                          傳　　真：021-55236681 公司地址：上海市翔殷路165號A區(qū)319室 郵編：200433

本發(fā)明涉及豬ApoE基因敲除載體及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，本發(fā)明的載體命名為pApoEKO-DTA-M，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO : 1所示，其構(gòu)建方法包括如下步驟：(1)擴(kuò)增豬ApoE基因側(cè)翼序列作為基因打靶的長臂和短臂；(2)短臂與打靶載體ploxp分別酶切、連接后，再與長臂連接；去除tk，與dta基因片段連接；(3)在長短臂之間插入特異性啟動子Cre，構(gòu)建得到ApoE基因敲除載體。本發(fā)明的豬ApoE基因敲除載體可用于培育敲除了ApoE基因的豬，用于動脈硬化模型動物的制備。

本發(fā)明公開了一種抗蟲融合基因,該基因包括從5’-3’依次含有編碼BT晶體毒素Cry1的核苷酸序列和編碼Cry9Aa毒素的核苷酸序列;且上述2個核苷酸序列位于同一個開放閱讀框內(nèi)。該抗蟲融合基因包括Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Aa的修飾基因、Cry1Ab的修飾基因或Cry1Ac的修飾基因;還包括Cry9Aa或者Cry9Aa經(jīng)過修飾的基因。本發(fā)明還同時公開了上述抗蟲融合基因所編碼的融合蛋白,該融合蛋白從N端至C端依次為Cry1晶體毒素和Cry9Aa毒素。本發(fā)明的融合蛋白能用于制備轉(zhuǎn)基因抗蟲農(nóng)作物。

本發(fā)明涉及幾丁質(zhì)合酶，特別涉及卵菌門中的幾丁質(zhì)合酶，其氨基酸序列為與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列在相似性在75％以上，優(yōu)選在80％以上，更優(yōu)選在90％以上，最優(yōu)選在95％以上且具有與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。所述幾丁質(zhì)合酶的活性水平能夠調(diào)節(jié)卵菌的活性孢子囊和活性游動孢子的產(chǎn)量從而影響卵菌的致病力或寄主的發(fā)病程度。

（給予一名突變患者的卵子體外注射一定劑量的野生型TRIP13 cRNA，可使卵子成功排出第一極體）復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院教授王磊和副研究員桑慶團(tuán)隊(duì)聯(lián)合國內(nèi)多家生殖中心，研究發(fā)現(xiàn)了導(dǎo)致人類卵子MI期阻滯的第二個突變基因TRIP13（

本發(fā)明公開了植物耐熱相關(guān)蛋白TaXPD及其編碼基因與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的蛋白質(zhì)為如下a1)或a2)或a3)：a1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)；a2)在序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)的N端或/和C端連接標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)；a3)將a1)或a2)所示的蛋白質(zhì)經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與植物耐熱性相關(guān)的蛋白質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證

缺乏安全、高效率的基因?qū)胼d體是當(dāng)前基因治療面臨的關(guān)鍵科學(xué)問題和技術(shù)難題。我們在前期研究中，針對目前常用的聚乙烯亞胺（PEI25K）非病毒基因載體面臨的不可降解、毒性大、難代謝、靶向性差等問題，采用肝素與小分子量聚乙烯亞胺（PEI）為主要原料，設(shè)計(jì)、制備了一種新型的肝素/PEI腫瘤靶向基因治療載體，具有可降解、毒性低、可靶向腫瘤、可靜脈注射等特點(diǎn)，顯示了較好的臨床應(yīng)用前景。本項(xiàng)目將在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化肝素/PEI的制備工藝，闡明影響肝素/PEI生物學(xué)效應(yīng)的關(guān)鍵因素，研究其體內(nèi)分布、代謝和早期安全性，研發(fā)一種具有臨床應(yīng)用前景的新型肝素/PEI靶向腫瘤基因治療載體，為創(chuàng)制新型腫瘤基因治療藥物提供新的基因?qū)胂到y(tǒng)選擇。 針對當(dāng)前常用PEI25K（聚乙烯亞胺）非病毒基因載體不可降解、毒性高和靶向性差的缺點(diǎn)，首先采用肝素偶聯(lián)小分子量PEI制備了一種新型可降解、毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的陽離子肝素-PEI基因載體，進(jìn)一步利用肝素具有腫瘤靶向性、帶負(fù)電荷、可在腫瘤部位快速降解、生物相容性好等特點(diǎn)，通過在DNA/肝素復(fù)合物表面修飾肝素，制備了一種腫瘤靶向的新型肝素/PEI基因載體。下一步將研究肝素/PEI的粒度分布、行貌、表面電位、穩(wěn)定性、基因裝載能力、降解行為、基因釋放行為等理化性質(zhì)，闡明制備工藝對這些重要理化性質(zhì)的影響規(guī)律。研究肝素/PEI的細(xì)胞毒性、轉(zhuǎn)染效率、腫瘤靶向性、體內(nèi)分布等生物學(xué)效應(yīng)，闡明肝素/PEI的理化性質(zhì)對這些體內(nèi)外生物學(xué)效應(yīng)的影響規(guī)律。基于我們已有的非病毒基因載體中試生產(chǎn)平臺，設(shè)計(jì)肝素/PEI中試生產(chǎn)流程，開展中試制備工藝研究。