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成果簡介： 本項目組于全球首次開發了基于熒光素酶的系列食源性致病菌快速檢測系統。利用該系統本項目組已實現了金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌O157、奇異變形桿菌、產氣腸桿菌、肺炎克雷伯氏桿菌的單獨和混合檢測，最低檢測限達10個copy，與熒光定量PCR法相比具有更高的特異性，檢測時間可縮短至2-3小時，且設備、試劑成本相對較低，與現有系列食源性致病

本發明涉及一組用于同時檢測腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌的三種病原的核酸、試劑盒和檢測方法，其中，用于多重PCR同時檢測三種病原的核酸包括腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌的上、下游引物；用于熒光定量PCR同時檢測三種病原的核酸還包括有各病原對應的探針。本發明還建立了一種比較高效、靈敏的，可同時檢測腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌這三種病原的檢測方法。該方法能有效提高檢測的靈敏度，避免假陰性結果的

本發明涉及辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)中的幾丁質合酶。其氨基酸序列為與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列在相似性在90％以上，優選在95％以上，更優選在98％以上且具有與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。所述辣椒疫霉病菌的幾丁質合酶的活性水平能夠調節活性孢子囊和活性游動孢子的產量從而影響辣椒疫霉病菌的致病力或寄主的發病程度。

項目階段:在研

中國科大陳宇星教授、周叢照教授和孫林峰教授課題組合作闡明了金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）胞壁酸（WTA）翻轉酶TarGH轉運WTA的機制和TarGH特異性抑制劑Targocil的抑制機制。該研究成果在線發表在微生物領域專業雜志mBio上。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是主要的臨床致病菌之一，其引發的感染難以治愈甚至可能致死。由于近年來抗生素濫用，出現了對所有的β-內酰胺類藥物都具有抗性的MRSA菌株。研究表明S. aureus細胞壁主要成分WTA是引起耐藥性的關鍵因素之一。在革蘭氏陽性菌中，WTA是一類共價連接在肽聚糖上的陰離子多聚物。WTA在細菌分裂、生物膜形成、宿主定殖以及細菌感染等過程中起著重要作用。因此，WTA合成路徑中的關鍵酶是新型抗菌藥物的重要靶點。在S. aureus中，WTA合成前體是N-乙酰葡糖胺修飾的多聚核糖醇長鏈，其通過共價鍵連接在錨定在細胞膜上的脂質載體Und-PP上。該Und-PP連接的多聚核糖醇長鏈前體先在細胞內完成合成，最后通過ABC轉運蛋白TarGH翻轉出細胞膜。作為最具潛力的抗生素靶標之一，TarGH及其抑制劑得到廣泛研究。先導化合物小分子Targocil是近期被鑒定出來特異性抑制TarGH效率較高的抑制劑，但是其抑制的分子機制并不清楚。為闡明TarGH轉運WTA的機理以及Targocil的抑制機制，作者用冷凍電鏡方法，解析了金黃色葡萄球菌WTA翻轉酶TarGH的同源蛋白，來自Alicyclobacillus herbarius菌的TarGH結構。其同源性為50%。TarGH結構總體分辨率為3.9 ?，其核心結構區域分辨率達到3.6?。由于未結合ATP，TarGH結構處于開口朝向細胞內的構象狀態。基于結構，作者計算出了底物轉運通道，通過對組成通道的氨基酸殘基性質分析并結合生理實驗，闡明了底物特異性識別機制。通過結構比對作者提出TarGH及其同源蛋白利用“曲柄連桿”原理來實現底物轉運的分子機制。具有類似結構特點的ABC轉運蛋白都可以利用這一機制通過相對微小的總體構象變化轉運較大的底物。作者進一步通過生化實驗和計算機模擬確定了Targocil結合TarGH的精確位點，并闡明了其抑制TarGH轉運胞壁酸的分子機制。

該研究以稻曲病菌富含半胱氨酸蛋白SCRE6為研究對象，證實了SCRE6是稻曲病菌中發揮重要毒性功能的效應蛋白；通過生化實驗揭示了SCRE6是一個以水稻免疫負調控因子OsMPK6（Mitogen-Activated Protein Kinase 6）為靶標的酪氨酸蛋白磷酸酶。

本發明提供了動物源食品致病菌鑒定及其耐藥和毒力基因檢測復合芯片。本發明提供了用于鑒定動物源食品致病菌、致病菌耐藥基因和/或致病菌毒力基因的探針，由序列1?序列171所示的單鏈DNA分子組成。本發明實驗結果表明：本發明的動物源食品中致病菌鑒定及其耐藥和毒力基因檢測復合芯片，能夠有效的達到同時鑒定細菌及其毒力和耐藥基因的綜合目的。

本發明公開了一套評測殺菌劑對枝干表層腐爛病菌鏟除效果的方法，涉及植物病害防治藥劑評測方法。具體方法是用腐爛病菌的孢子懸浮液接種蘋果的活體枝條，讓接種枝條在自然條件下生長2~4周后，在接種枝條表面施用待測殺菌劑，施藥1周后，從樹體上剪取處理枝條，破壞芽部及周圍皮層組織，在離體條件下誘導傷口發病，依據傷口發病的百分率，評測殺菌劑的鏟除效果。本發明克服了現有技術難以評測殺菌劑對潛伏于枝條表層腐爛病菌鏟除

本發明公開了一套快速檢測蘋果枝條內輪紋病菌侵染量的簡易方法，涉及植物體內病原菌侵染量的快速檢測技術。本發明適用于檢測基部直徑不超過3厘米活體蘋果枝條的帶菌量。具體方法為在待檢測枝條的基部環剝皮層，寬度2~10毫米；用有效成份含量60g/L~100g/L的百草枯藥液浸泡吸水紙、脫脂棉、棉線或布條，取出瀝干后，纏繞在環剝口處，用膠帶或塑料膜包嚴；從處理后的第3天開始，檢查記錄處理枝條上發生病變和未發生