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本發(fā)明涉及一種綠盲蝽唾液酶中蛋白酶與纖維素酶的體外提取測定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營養(yǎng)法提取綠盲蝽唾液酶，并測定綠盲蝽中蛋白酶與纖維素酶的活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營養(yǎng)介質(zhì)，利用酶與底物反應(yīng)的原理，測定綠盲蝽唾液中蛋白酶、纖維素酶的活性。本方法材料易得，操作簡單方便，制作成本低，占空間小，可實現(xiàn)綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續(xù)回收利用。

研發(fā)階段/n本發(fā)明涉及一種制備甲殼素脫乙酰酶的方法，該方法用短柄梨孢帚霉（Scopulariopsisbrevicaulis）作甲殼素脫乙酰酶產(chǎn)生菌，經(jīng)活化后將其接入到含有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵容器中，使其在pH值為6.5-7.0之間，溫度在27-29oC、轉(zhuǎn)速200-240rpm的搖床上發(fā)酵90-100小時，發(fā)酵液經(jīng)分離、鹽析、純化得甲殼素脫乙酰酶產(chǎn)品。利用本發(fā)明的方法制備的甲殼素脫乙酰酶每ml發(fā)酵液的活力單位最高可達(dá)36U。

【發(fā) 明 人】劉睿;吳皓;朱蘊菡;程建;卞慧敏;王令充;王欣之【技術(shù)領(lǐng)域】本發(fā)明涉及一種活性多肽，具體涉及一種從四角蛤蜊軟體酶解物中分離得到的具有抑制ACE活性的多肽，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。【摘要】本發(fā)明公開了一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽及其制備方法和應(yīng)用，該抑制肽的氨基酸序列為：Leu-Ala-Ser-Pro-Thr-Met。本發(fā)明采用現(xiàn)代生化技術(shù)手段，對四角蛤蜊中的抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性成分進(jìn)行跟蹤篩選和評價，通過酶解、超濾、反相高效液相色譜法等純化方法制備得到，實驗結(jié)果表明，該抑制肽具有很好的抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的作用，具有很好的抗高血壓的功效，并且安全性能好，具有很好的應(yīng)用前景。

本技術(shù)首先根據(jù)鴨胸軟骨的化學(xué)組成設(shè)計了一種用于提取鴨硫 酸軟骨素的新型復(fù)合蛋白酶的基礎(chǔ)配方，并利用復(fù)配酶制備鴨硫酸軟骨素，其 工藝包括鴨胸軟骨骨粉的制備、鴨胸軟骨骨粉的酶解提取、蛋白質(zhì)的沉降、硫 酸軟骨素粉末四個步驟。本發(fā)明采用了復(fù)配酶解法提取鴨胸軟骨的硫酸軟骨素， 采用新型復(fù)合蛋白酶和胰蛋白酶復(fù)配，去掉了堿提這一步，在復(fù)配酶使用上也 進(jìn)行了優(yōu)化，其收率比其它方法提高了 20%左右，產(chǎn)品純度達(dá)到 90%~95%。用復(fù) 合酶代替稀堿或濃堿解離軟骨能夠大大降低對環(huán)境的污染，并且可以有效縮短 生產(chǎn)周期、降低生產(chǎn)成本、增加了產(chǎn)品收率、提高產(chǎn)品質(zhì)量，填補(bǔ)了該領(lǐng)域的 空白。 技術(shù)優(yōu)點或者效益預(yù)測:硫酸軟骨素(Chondroitinsulfate，CS)是 D-葡萄糖 醛酸和 N-乙酰氨基半乳糖以β-1,4-糖苷鍵連接而成的重復(fù)二糖單位組成的酸 性黏多糖。硫酸軟骨素具有抗凝血、抗炎癥、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、降血 脂、防止動脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)體內(nèi)水分、清除自由基和延緩衰老等多種生理功 能，可應(yīng)用于食品、藥品、各種保健品及高檔化妝品中。我國是全球硫酸軟骨 素產(chǎn)量最大的國家，占全球產(chǎn)量的 80%以上，年平均產(chǎn)量多于 4000 噸；我國硫 酸軟骨素主要出口到美國、歐洲、日本等地，其中美國作為我國硫酸軟骨素第 一大出口市場，出口份額約占 50%。所以，隨著硫酸軟骨素生物活性功能不斷研 究及其應(yīng)用領(lǐng)域的不斷擴(kuò)展，硫酸軟骨素用途越來越廣，具有廣闊市場應(yīng)用前 景。

高效脂肪酶催化制備脂溶性維生素關(guān)鍵技術(shù)及產(chǎn)業(yè)化

本項目涉及一種新型的超級糖胺聚糖裂解酶 HCLase. 通過對提取的外周血基因組 DNA 與目的基因 GSTM3 啟動子的甲基化特異 性引物對和探針、內(nèi)參基因 ALU-C4 的特異性引物對和 Taqman 熒光探針序列， 對處理過的 DNA 進(jìn)行實時定量聚合酶鏈?zhǔn)剑≒CR）反應(yīng),用甲基化特異性 PCR 205 的方法檢測目的基因 GSTM3 和內(nèi)參基因 ALU-C4 的閾值循環(huán)值，并計算出基 因 GSTM3 甲基化定量值。有助于評估病情、判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療。

本發(fā)明公開了一種海洋黑曲霉生產(chǎn)耐鹽纖維素酶的液體發(fā)酵方法。包括如下步驟:1)從東海近海10～20m深處的泥土里篩選得到一株海洋黑曲霉;2)海洋黑曲霉接種于PDA培養(yǎng)基上,32～40℃下培養(yǎng)60～90小時,得到斜面孢子,斜面孢子保藏于4℃;3)斜面孢子接種于PDA-1培養(yǎng)基,在32～40℃下培養(yǎng)60～90h,得到活化的孢子;4)活化的孢子接種于茄子瓶斜面,42℃培養(yǎng)74小時,得到擴(kuò)培的茄子瓶斜面孢子;5)擴(kuò)培得到的茄子瓶斜面孢子用滅菌人工海水稀釋到108個孢子/ml,接種于液體發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基,發(fā)酵5～10天,得到纖維素酶。本發(fā)明具有產(chǎn)酶活高、酶穩(wěn)定、耐鹽性好等優(yōu)點,生產(chǎn)的纖維素酶可以在較高鹽含量的條件下降解纖維素,為該水解物的后續(xù)應(yīng)用打下基礎(chǔ)。

骨素是從鯊魚魚翅骨中提取的。

海藻素是以泡葉藻、馬尾藻為原料，采用先進(jìn)的提取工藝精制而成，提取海藻中豐富的礦物質(zhì)及微量元素等成分，同時還含有一定數(shù)量的多酚化合物、海藻多糖和大量的生長調(diào)節(jié)因子，如細(xì)胞分裂素、生長素、赤霉素、甜菜堿、多胺等，極大的保留了純天然活性成分。這些純天然的活性成分，可刺激植物內(nèi)非特異性活性因子的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)內(nèi)源激素的平衡，促進(jìn)植物的光合作用協(xié)調(diào)生長發(fā)育，提高其生命活力和對病、蟲、旱、澇、低溫等逆境的抗性。 海藻素屬于天然萃取物，無毒無害，無副作用的最佳植物營養(yǎng)食物，促進(jìn)種子萌芽和幼苗生長、提高作物產(chǎn)量、改善作物品質(zhì)、提高作物抗旱性、增效氮素等功效。可與其他肥料復(fù)配成新型的固體或液體肥，也可以通過海藻素中的多糖與農(nóng)藥（強(qiáng)堿性農(nóng)藥除外）形成復(fù)合體，是一種很好的農(nóng)藥稀釋增效劑，也顯著提高藥效并延長藥效期。 海藻素的五大特點  海藻素比傳統(tǒng)肥料營養(yǎng)全面，作物施用后生長均衡，增產(chǎn)效果顯著，且極少出現(xiàn)缺素癥。 海藻素以天然海藻為主要原料，含有大量從海藻中提取的有利于植物生長發(fā)育的天然生物活性物質(zhì)和海藻從海洋中吸收并富集在體內(nèi)的礦物質(zhì)營養(yǎng)元素，包括海藻多糖、酚類多聚化合物、甘露醇、甜菜堿、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)（細(xì)胞分裂素、赤霉素、生長素和脫落酸等）和氮、磷、鉀及鐵、硼、鉬、碘等微量元素。此外，為增加肥效和肥料的螯合作用，部分產(chǎn)品還溶入了適量的腐殖酸和適量微量元素，可滿足作物生長各階段對營養(yǎng)的需求。 海藻素中含有大量抗病因子及特殊成分，肥藥雙效。作物施用后抗逆抗病性顯著增強(qiáng)，葉面噴施可提高農(nóng)藥效果。  海藻素中含有的海藻多糖及低聚糖、甘露醇、酚類多聚化合物、甜菜堿、海藻酸及天然抗生素等物質(zhì)，具有顯著的抑菌抗病毒、驅(qū)蟲效果，真正起到肥藥作用，大幅增強(qiáng)作物的抗寒、抗旱、抗病、抗倒伏、抗鹽堿能力，對疫病、病毒病、炭疽、霜霉、灰霉、白粉病、枯萎病等產(chǎn)生較強(qiáng)的抗性。此外，海藻素中的海藻酸可以降低水的表面張力，在植物表面形成一層薄膜，增大接觸面積，使水溶性物質(zhì)比較容易透過莖葉表面細(xì)胞膜進(jìn)入植物細(xì)胞，使植物最有效地吸收海藻提取液中的營養(yǎng)成分。如果把海藻素和殺蟲劑、殺菌劑混合使用，具有增效作用，可降低噴灑費用。  海藻素中含有大量的高活性成分，植物易吸收。作物施用后長勢旺盛，可明顯提高產(chǎn)量及作物的品質(zhì)。  海藻中所特有的海藻多糖、海藻酸、高度不飽和脂肪酸等物質(zhì)，具有很高的生物活性，可刺激植物體內(nèi)非特異性活性因子的產(chǎn)生。同時，海藻素中還含有天然植物生長調(diào)節(jié)劑，如：生長素、細(xì)胞分裂素類物質(zhì)和赤霉素等，其比例與陸生植物中各激素比例相近，具有很好調(diào)節(jié)內(nèi)源激素平衡的作用。作物施用后，產(chǎn)量及品質(zhì)明顯提高，葉菜類增產(chǎn)20%以上，糧食作物增產(chǎn)15%以上，果樹增產(chǎn)10%～30%，同時使一級果的數(shù)量增加到80%以上，能明顯提高煙草、棉花、花卉等經(jīng)濟(jì)作物品質(zhì)，尤其是對大棚蔬菜作物，增產(chǎn)增值效果十分顯著。  海藻素含有豐富的有機(jī)質(zhì)及緩釋因子，肥效長，可改善土壤微生態(tài)、活土促根及抗重茬。  海藻素可直接使土壤或通過植物使土壤增加有機(jī)質(zhì)，激活土壤中的各種有益微生物。這些微生物可在植物、微生物代謝循環(huán)中起著催化劑的作用，使土壤的生物效力增加。植物和土壤微生物的代謝物可為植物提供更多的養(yǎng)分。同時，海藻多糖形成的螯合系統(tǒng)可以使?fàn)I養(yǎng)緩慢釋放，延長肥效。另外，它含有的天然化合物如海藻酸鈉是天然土壤調(diào)理劑，能促進(jìn)土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)的形成，改善土壤內(nèi)部孔隙空間，協(xié)調(diào)土壤中固、液、氣三者比例，恢復(fù)由于土壤負(fù)擔(dān)過重和化學(xué)污染而失去的天然膠質(zhì)平衡，增加土壤生物活力，促進(jìn)速效養(yǎng)分的釋放，有利于根系生長，提高作物的抗逆性及抗重茬能力。 海藻素天然安全無公害。  傳統(tǒng)的化學(xué)肥料肥效單一、污染嚴(yán)重，長期使用會導(dǎo)致土壤結(jié)構(gòu)被破壞。海藻素屬天然海藻提取物，與陸生植物有良好的親和性，對人、畜無毒無害，對環(huán)境無污染，具有其他任何化學(xué)肥料都無法比擬的優(yōu)點，在國外被列入有機(jī)食品專用肥料。海藻素聚合了海洋中多種活性物質(zhì)，具備營養(yǎng)全面、抗病增產(chǎn)、活土、無公害等許多優(yōu)點，是真正符合現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展方向的好肥料。