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本技術(shù)成果通過(guò)整合電化學(xué)、微機(jī)電和自動(dòng)化控制技術(shù)，開發(fā)了一套適合于 出入境口岸動(dòng)物疫病等的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)設(shè)備 便攜式動(dòng)物疫病現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)儀。檢 測(cè)儀在結(jié)構(gòu)上不同于現(xiàn)有的進(jìn)口濁度儀，采用自主開發(fā)的微機(jī)電加熱技術(shù)保證疫 病基因的高效等溫?cái)U(kuò)增，同時(shí)集成可視化微型紫外檢測(cè)模塊使得結(jié)果的觀察和判 斷更為方便。該儀器具備穩(wěn)定的溫度控制電路、便捷的結(jié)果檢測(cè)方式，體積小方 便攜帶，且具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，避免了使用價(jià)格昂貴，且不便攜帶的實(shí)時(shí)濁度儀、 PCR儀或水浴鍋，適合于出入境口岸對(duì)動(dòng)物疫病等進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)的快速診斷或篩查。實(shí)驗(yàn)樣機(jī)采用鏈置換聚合酶引導(dǎo)下的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)生成大量焦磷酸 鎂沉淀和DNA產(chǎn)物的原理，包括四路并行的單色激光器和二極管陣列光電檢測(cè) 器，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中的生物基因（DNA）進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)和分析。同時(shí)，利用磁珠 法提取核酸的基本理論，研制了手持式核酸提取裝置，對(duì)細(xì)胞中的核酸（DNA 和RNA）完成純化和提取，完成的樣本前處理工作，整個(gè)過(guò)程不需要離心機(jī)，單 個(gè)提取時(shí)間不超過(guò)30分鐘。從樣本前處理到后續(xù)的基因檢測(cè)，完成單個(gè)樣本檢 測(cè)的平均時(shí)間不超過(guò)60分鐘，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)食品、農(nóng)產(chǎn)品、肉制品、水產(chǎn)品中各類 病原微生物的快速檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)查驗(yàn)。

本發(fā)明公開了一種水稻側(cè)根控制基因OsIAA11編碼的蛋白質(zhì),其具有SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列。本發(fā)明還同時(shí)公開了編碼上述蛋白質(zhì)的基因,該基因具有SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列。本發(fā)明的基因能用于構(gòu)建具有水稻側(cè)根控制功能的轉(zhuǎn)基因水稻。由于側(cè)根的正常發(fā)生發(fā)育對(duì)維持水稻生長(zhǎng)發(fā)育以及高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)是必不可少的,而且該基因僅影響側(cè)根發(fā)生發(fā)育,因此在分子育種中存在較大的應(yīng)用潛力。

通過(guò)對(duì)個(gè)體全基因組單核苷酸多態(tài)性（SNP）信息與疾病表型的全基因組關(guān)聯(lián)分析，以及兩階段獨(dú)立人群驗(yàn)證，最終在2942例鼻咽癌患者中發(fā)現(xiàn)了位于14號(hào)染色體上CEP128 基因啟動(dòng)子區(qū)的變異位點(diǎn)rs17111237與放射性腦損傷的發(fā)生存在顯著關(guān)聯(lián)，攜帶危險(xiǎn)型等位基因的個(gè)體CEP128基因的表達(dá)水平顯著較低。特別地，聯(lián)合臨床危險(xiǎn)因素，攜帶危險(xiǎn)基因型的高危鼻咽癌患者放射性腦損傷五年發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)為攜帶保護(hù)基因型的低危患者的3倍。CEP128基因編碼中心體蛋白，在纖毛形成和細(xì)胞周期調(diào)控中起著至關(guān)重要的作用。研究表明，CEP128可通過(guò)與CASK、CEP72等蛋白相互作用，維持纖毛的功能并調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)射線等外界刺激的反應(yīng)。我們進(jìn)一步以放射性腦損傷的主要靶細(xì)胞——神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞為模型探究了CEP128基因的功能，通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)敲減CEP128基因的表達(dá)顯著增加了神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的放射敏感性。

開發(fā)了一種還原敏感的多功能載體材料，載體的疏水性嵌段包載抗腫瘤光動(dòng)力藥物Ce6，攜帶NTA基團(tuán)的嵌段則通過(guò)NTA和Cas9蛋白末端His標(biāo)簽之間的特異性結(jié)合高效負(fù)載Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物，然后通過(guò)靜電組裝在外層引入靶向腫瘤組織的iRGD分子。這樣的載體結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)和藥物聯(lián)合輸送為實(shí)現(xiàn)腫瘤組織特異性的基因編輯和聯(lián)合治療提供了可行性。納米藥物靶向輸送至腫瘤細(xì)胞后，在近紅外光的輻照下，Ce6產(chǎn)生的活性氧使溶酶體破裂，使納米藥物從溶酶體中逃逸出來(lái)，NTA和載體聚合物之間的二硫鍵可響應(yīng)胞質(zhì)內(nèi)的谷胱甘肽等還原劑而斷裂，從而將Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物從載體上釋放出來(lái)，執(zhí)行基因編輯功能。在正常的組織中，由于沒(méi)有近紅外光的輻照，Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物難以從溶酶體中逃逸，無(wú)法執(zhí)行基因編輯的功能。通過(guò)紅外光輻照和還原敏感設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)了腫瘤組織特異的基因編輯。此外，腫瘤細(xì)胞在受到Ce6所生成活性氧攻擊時(shí)，會(huì)上調(diào)Nrf2（一種活性氧代謝的關(guān)鍵蛋白）的表達(dá)，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)活性氧的耐受性。使用靶向Nrf2基因的sgRNA，可以通過(guò)聯(lián)合輸送的Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物使Nrf2基因失活，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)活性氧的敏感性。總而言之，通過(guò)多功能載體聯(lián)合輸送Ce6和Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物，一方面實(shí)現(xiàn)了腫瘤特異性的基因編輯，另一方面也實(shí)現(xiàn)了基因編輯和光動(dòng)力治療的聯(lián)合治療，協(xié)同提高了基因編輯的特異性和治療效果，為基因編輯技術(shù)的發(fā)展提供了一個(gè)新的方向。

在基因治療中，載體將治療基因?qū)氚屑?xì)胞，使其與宿主染色體整合為一體或在宿主細(xì)胞中表達(dá)特定蛋白質(zhì)，從而治療因基因異常或缺陷而導(dǎo)致的疾病。因此，基因治療成敗的關(guān)鍵在于基因遞送系統(tǒng)。基因治療市場(chǎng)未來(lái)市場(chǎng)空間巨大。據(jù)Clinical Trial數(shù)據(jù)，目前基因藥物以病毒載體為主，約占所有載體的70%，未來(lái)病毒載體市場(chǎng)前景十分廣闊。2017年FDA批準(zhǔn)羅氏公司的基于AAV病毒載體的基因療法Luxturna用來(lái)治療患有特定遺傳性眼疾的兒童和成人患者。從實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)單的基因過(guò)表達(dá)、體外的基因干擾、基因編輯（CRISPR/Cas9）技術(shù) 、CAR-T免疫療法技術(shù)、到腫瘤、神經(jīng)、代謝、眼科、心臟、肝臟、肺等臨床前動(dòng)物和臨床人體試驗(yàn)的研究，基因病毒載體的應(yīng)用無(wú)處不在。我國(guó)離世界先進(jìn)水平在技術(shù)上存在巨大差距，基因運(yùn)載工具由于開發(fā)難度大，生產(chǎn)工藝要求高，目前我國(guó)和國(guó)際先進(jìn)技術(shù)相比還存在非常大的差距，國(guó)內(nèi)基因治療藥物的研發(fā)還處于起步階段，還存在巨大的市場(chǎng)需求沒(méi)有得到滿足，而目前美國(guó)FDA已有批準(zhǔn)的的基因治療藥物收費(fèi)非常高昂。    目前采用病毒載體的基因療法已經(jīng)成功用于血友病，先天性黑矇，脊髓肌肉萎縮癥等單基因疾病的治療。

產(chǎn)品詳細(xì)介紹  由于qPCR是實(shí)時(shí)定量檢測(cè)致病病原體基因核酸，因此它比化學(xué)發(fā)光、實(shí)時(shí)分辨、蛋白芯片等免疫學(xué)方法更具獨(dú)到優(yōu)勢(shì)。   基因擴(kuò)增儀實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀|熒光定量pcr儀價(jià)格|abi熒光定量pcr儀|熒光定量pcr|熒光定量pcr原理|實(shí)時(shí)熒光定量pcr|熒光定量pcr技術(shù)|熒光定量pcr結(jié)果分析|實(shí)時(shí)熒光定量pcr技術(shù)|熒光定量pcr步驟|基因擴(kuò)增儀-實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀價(jià)格原理科研型TC988C（48孔） 產(chǎn)品編號(hào)：TC988C   產(chǎn)品規(guī)格：48孔X0.2 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：由于qPCR是實(shí)時(shí)定量檢測(cè)致病病原體基因核酸，因此它比化學(xué)發(fā)光、實(shí)時(shí)分辨、蛋白芯片等免疫學(xué)方法更具獨(dú)到優(yōu)勢(shì)。 產(chǎn)品詳情：僅供科研使用 國(guó)際領(lǐng)先水平的TC988型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀適用于臨床及科研以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為特征的、以實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)分析DNA/RNA為目的的病原體檢測(cè)及基因分析。 動(dòng)物疾病檢測(cè)：禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。 食品安全：食源微生物、食品過(guò)敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測(cè)。 科學(xué)研究：醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究。 應(yīng)用行業(yè)：大學(xué)及研究所 技術(shù)原理： 標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性，低溫復(fù)性，適溫延伸的熱循環(huán)，并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律，與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的Taqman探針被切斷，熒光素游離于反應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng)，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度，求得CT值，同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。 技術(shù)參數(shù)： 標(biāo)本載體 0.2ml薄壁PCR離心管 標(biāo)本數(shù)量 標(biāo)本數(shù)量48個(gè)，包括4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品 試    劑 SYBR Green I，F(xiàn)AM，Tex Red，F(xiàn)ITC等熒光染料，開放式PCR試劑 反應(yīng)體系 10-100μL 建議質(zhì)控 四個(gè)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照   指標(biāo) 熒光激發(fā)波長(zhǎng) 470nm 熒光發(fā)射波長(zhǎng) 530nm，640nm，710nm 570nm，605nm 熒光檢測(cè)方式 光開關(guān)陣列組合光電倍增管PMT方式? 控溫范圍 4.0℃-99.0℃? 熱蓋溫度 100℃～120℃? 升/降溫速度 ≥4.0℃/S（Max）? 溫度均勻性 ≤±0.3℃? 溫度精確度 ≤±0.3℃? 溫度顯示精度 0.1℃? 檢測(cè)范圍 101～1010DNA/RNA copy/ml CT值重復(fù)性誤差 CV≤2.1％?重要 核酸精度相關(guān)系數(shù) R≥0.997?重要   軟件 溫階 1～9 循環(huán) 1～99 保溫時(shí)間 1～9999秒     +.3.0.0.0..366999文件 1～9個(gè)連接 升級(jí)方式 遠(yuǎn)程硬件內(nèi)控軟件升級(jí)   系統(tǒng)接口 RS-232C串行接口，雙向數(shù)據(jù) 主機(jī)操作系統(tǒng) Windows2000/XP 產(chǎn)品外形尺寸 50cm× 40cm × 35cm 產(chǎn)品重量 25kg 使用環(huán)境 溫度5～40℃，相對(duì)濕度≤80％ 使用電源 AC220 × （1±10%）V,50 × （1±2%）HZ 功耗 1100VA   多規(guī)格 提供96孔，多通道/多色、36孔等不同規(guī)格產(chǎn)品 產(chǎn)品特點(diǎn)： 專利技術(shù)應(yīng)用實(shí)現(xiàn)快速高效均衡擴(kuò)增檢測(cè)由光開關(guān)陣列、自聚焦透鏡和尾纖準(zhǔn)直器及變?cè)鲆嫖⒐釵/E裝置組成的MEMS有機(jī)整體，在以16位單片機(jī)為核心的電控裝置管理下，能在毫秒級(jí)時(shí)間內(nèi)完成多個(gè)標(biāo)本快速均衡掃描檢測(cè)，避免了機(jī)械掃描方式或CCD掃描方式引起的時(shí)間滯后或漸暈誤差。實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)樣本的PCR熱循環(huán)擴(kuò)增及高通量實(shí)時(shí)熒光激發(fā)和定量檢測(cè)。  1.走在PCR技術(shù)的前列 在PCR儀研發(fā)和市場(chǎng)化領(lǐng)域中歷史悠久； 將標(biāo)準(zhǔn)化的PCR檢測(cè)技術(shù)成功廣泛用于臨床；  2.快速實(shí)時(shí)PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)了DNA/mRNA檢測(cè)的快速性 實(shí)時(shí)檢測(cè)啟用熒光探針標(biāo)記特定核酸的93 方法使準(zhǔn)確性更高； 簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)PCR方法； 使用最少的樣本量，在一小時(shí)左右出結(jié)果； 3.簡(jiǎn)便閉管分析使您完成加樣后就無(wú)須再接觸樣本 減少樣本消耗殆盡風(fēng)險(xiǎn)； 縮短了出報(bào)告時(shí)間； 簡(jiǎn)化了試驗(yàn)步驟； 4.提高了用戶高級(jí)應(yīng)用的靈活性 提供了用戶自定義PCR操作平臺(tái)； 建立您的用戶自定義應(yīng)用； 分析用戶自定義試驗(yàn)； 相關(guān)鏈接：http://www.tocan.cn/index.php?do=product&CategoryID=1004   詳情請(qǐng)鏈接網(wǎng)址：www.tocan.cn聯(lián)系電話：021-51863860、18917331948   聯(lián)系QQ：278622785                          傳　　真：021-55236681 公司地址：上海市翔殷路165號(hào)A區(qū)319室 郵編：200433

本發(fā)明涉及豬ApoE基因敲除載體及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，本發(fā)明的載體命名為pApoEKO-DTA-M，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO : 1所示，其構(gòu)建方法包括如下步驟：(1)擴(kuò)增豬ApoE基因側(cè)翼序列作為基因打靶的長(zhǎng)臂和短臂；(2)短臂與打靶載體ploxp分別酶切、連接后，再與長(zhǎng)臂連接；去除tk，與dta基因片段連接；(3)在長(zhǎng)短臂之間插入特異性啟動(dòng)子Cre，構(gòu)建得到ApoE基因敲除載體。本發(fā)明的豬ApoE基因敲除載體可用于培育敲除了ApoE基因的豬，用于動(dòng)脈硬化模型動(dòng)物的制備。

本發(fā)明公開了一種抗蟲融合基因,該基因包括從5’-3’依次含有編碼BT晶體毒素Cry1的核苷酸序列和編碼Cry9Aa毒素的核苷酸序列;且上述2個(gè)核苷酸序列位于同一個(gè)開放閱讀框內(nèi)。該抗蟲融合基因包括Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Aa的修飾基因、Cry1Ab的修飾基因或Cry1Ac的修飾基因;還包括Cry9Aa或者Cry9Aa經(jīng)過(guò)修飾的基因。本發(fā)明還同時(shí)公開了上述抗蟲融合基因所編碼的融合蛋白,該融合蛋白從N端至C端依次為Cry1晶體毒素和Cry9Aa毒素。本發(fā)明的融合蛋白能用于制備轉(zhuǎn)基因抗蟲農(nóng)作物。

本發(fā)明涉及幾丁質(zhì)合酶，特別涉及卵菌門中的幾丁質(zhì)合酶，其氨基酸序列為與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列在相似性在75％以上，優(yōu)選在80％以上，更優(yōu)選在90％以上，最優(yōu)選在95％以上且具有與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。所述幾丁質(zhì)合酶的活性水平能夠調(diào)節(jié)卵菌的活性孢子囊和活性游動(dòng)孢子的產(chǎn)量從而影響卵菌的致病力或寄主的發(fā)病程度。