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癌癥已成為公眾健康的重大殺手，每年因癌癥死亡的人數(shù)接近1000萬，傳統(tǒng)的放療、化療由于過高的毒副作用，外科手術(shù)部位有限而難以有效治療，靶向藥物的發(fā)展極大推動了腫瘤治療，然而也存在易產(chǎn)生耐藥性等問題。免疫療法作為新興的腫瘤治療策略，具有精準(zhǔn)打擊、低毒副作用、不易產(chǎn)生耐藥等優(yōu)點逐步受到關(guān)注，其中溶瘤病毒能夠選擇性在腫瘤細胞中復(fù)制而不破壞正常細胞，因而具有很大的應(yīng)用前景（詳細內(nèi)容見前期推送科普系列——溶瘤病毒腫瘤治療）。目前許多溶瘤病毒以實體瘤為治療靶標(biāo)，而應(yīng)用于血液腫瘤的成功案例卻很少。近日，吉林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院于湘暉課題組在國內(nèi)主辦的SCI雜志Signal Transduction and Targeted Therapy上在線發(fā)文，題為“Enhancing the antitumor activity of an engineered TRAIL-coated oncolytic adenovirus for treating acute myeloid leukemia”，該研究構(gòu)建了表達TRAIL融合蛋白的溶瘤腺病毒，與人參皂苷Rh2聯(lián)用，實現(xiàn)選擇性殺傷血液腫瘤，為白血病的治療提供了新思路。急性髓系白血?。ˋML）是髓系造血干細胞或祖細胞的惡性病變，原始細胞異常增生、分化。盡管一線治療、鞏固化療的方案能夠完全緩解許多患者病癥，但是仍有部分患者無明顯療效，還有一些患者存在復(fù)發(fā)情況，亟需新的治療方式。之前的研究中，研究者曾構(gòu)建了表面展示腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）的腺病毒，能夠結(jié)合腫瘤表面死亡受體DR4和DR5，誘導(dǎo)細胞凋亡，減弱病毒肝臟趨向性。為了更好評估病毒載體的感染與復(fù)制造成的影響，研究者通過流式細胞儀分析了病灶內(nèi)分離的AML細胞上的TRAIL受體（死亡受體DR4/5、誘餌受體DcR1/2）和腺病毒受體（CAR、整合素 αvβ3 和整合素αvβ5），發(fā)現(xiàn)多數(shù)表達中等水平TRAIL受體，培養(yǎng)細胞系也有類似現(xiàn)象，而正常粒細胞、T細胞這兩類受體表達很低，因此選擇TRAIL表面展示腺病毒能夠較好進行靶向治療。研究者為構(gòu)建溶瘤腺病毒，通過將腺病毒A3衣殼蛋白IX插入“拉鏈結(jié)構(gòu)”，使得TRAIL能夠與“拉鏈結(jié)構(gòu)”偶聯(lián)展示在衣殼蛋白表面。由于只有約17%的衣殼蛋白連接上了TRAIL，研究者試圖采用新的策略：在大腸桿菌中表達可溶性TRAIL-“拉鏈結(jié)構(gòu)”融合蛋白，再將可溶性的蛋白與病毒粒子孵育，離心后分離表面覆蓋可溶性TRAIL的腺病毒粒子。通過變性凝膠電泳、高效液相色譜、斑點雜交等證實了改造的腺病毒zA4載有活性更高的TRAIL。細胞實驗也證明zA4相較于原來的版本A3、A4侵染能力、特異性顯著提高。細胞結(jié)合試驗用于評估侵染活性，證明了攜帶TRAIL顯著促進了腺病毒的內(nèi)吞；定量PCR試驗用于評估病毒復(fù)制能力，zA4在癌細胞中復(fù)制顯著強于其他載體。為有效評估zA4載體抗白血病活性，在不同感染復(fù)數(shù)下以不同載體侵染培養(yǎng)AML細胞系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)zA4顯著誘導(dǎo)培養(yǎng)細胞的凋亡。對臨床分離原代AML細胞深入探究，zA4顯著抑制了大部分AML細胞的增殖，然而值得注意的是，少部分不表達死亡受體的細胞無明顯變化。溶瘤病毒能否在體內(nèi)發(fā)揮作用直接決定了其是否具有臨床價值，基于之前的細胞實驗，研究者對皮下移植造模小鼠注射了腺病毒載體，發(fā)光成像和病毒基因組分析均證實了載體腫瘤組織靶向性。zA4處理小鼠顯著抑制腫瘤生長，正常器官組織形態(tài)學(xué)、生化特征均未變化，因此未產(chǎn)生肝損傷。同時還觀察到凋亡重要因子caspase-3水平顯著上調(diào)。在更加真實的小鼠白血病模型中，也觀察到相似的結(jié)果，病毒在腫瘤消失后也并不會長時間存在。然而總有一些原代AML細胞TRAIL表達量很低，影響zA4的效果。聯(lián)系之前的研究，人參皂苷Rh2能夠誘導(dǎo)白血病細胞死亡受體表達和細胞毒性，研究者就試圖通過Rh2增強TRAIL誘導(dǎo)的細胞死亡。通過IC50測定、信號通路分析證實了存在協(xié)同效應(yīng)，在細胞、小鼠水平上都得到了證實，兩者聯(lián)合使用促進白血病腫瘤的凋亡。該研究通過優(yōu)化載體結(jié)構(gòu)、聯(lián)合用藥等方式增強了溶瘤腺病毒的活性，拓寬了溶瘤病毒的潛在適應(yīng)癥范圍，后續(xù)深入的分子機制探究以及療效的評估將有助于為白血病治療開辟新的道路。

項目成果/簡介:溶瘤痘苗病毒在體內(nèi)有四種形式，其中EEV外包裹細胞膜，能逃避機體免疫反應(yīng)，使其特別適合靜脈注射（圖A）。表達治療基因A的溶瘤痘苗病毒有非常好的治療效果（圖B），VV-A與和PD-1抗體很好的協(xié)同作用（圖C）。知識產(chǎn)權(quán)類型:發(fā)明專利技術(shù)先進程度:達到國際先進水平成果獲得方式:獨立研究獲得政府支持情況:國家級計劃/專項類別:國家重點研發(fā)計劃獲得經(jīng)費:445.00萬元

溶瘤痘苗病毒在體內(nèi)有四種形式，其中EEV外包裹細胞膜，能逃避機體免疫反應(yīng)，使其特別適合靜脈注射（圖A）。表達治療基因A的溶瘤痘苗病毒有非常好的治療效果（圖B），VV-A與和PD-1抗體很好的協(xié)同作用（圖C）。

亦諾微是溶瘤病毒領(lǐng)域技術(shù)的原創(chuàng)團隊，周國瑛是羅茲曼院士是多項溶瘤病毒相關(guān)技術(shù)的原創(chuàng)人，他們在芝加哥大學(xué)期間原創(chuàng)的靶向溶瘤病毒專利更是全球范圍內(nèi)的首創(chuàng);羅茲曼院士在內(nèi)的四位美國病毒和微生物學(xué)界泰斗創(chuàng)始股東，擔(dān)任Gilead、 Merck等多家跨國領(lǐng)先藥企的董事會成員及科學(xué)顧問;創(chuàng)始人周國瑛是組織部 千人計劃專家，潛心研究溶瘤病毒20年，是世界上研發(fā)真正的靶向皰疹溶瘤病毒的首人并擁有核心專利。點擊上方按鈕聯(lián)系科轉(zhuǎn)云平臺進行溝通對接！

中試階段/n重組溶瘤 II 型單純皰疹病毒(OH2)注射劑屬于腫瘤免疫與腫瘤基因治療 I 類生物創(chuàng)新藥物，是繼腫瘤手術(shù)、放療和化療治療三大傳統(tǒng)手段后的第四大常規(guī)治療手段， 具有安全性高、靶向性好、殺傷效率高、副作用小和成本低等特點。根據(jù)動物實驗顯示，OH2 注射劑對結(jié)腸癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、頭頸部腫瘤等實體瘤具有良好的治療效果。同時， OH2可與聯(lián)合化療、放療、單抗類藥物聯(lián)合應(yīng)用。OH2 注射劑已完成主細胞庫和工作細胞庫建立、OH2 三級種子批建立、初步穩(wěn)定性研究等臨床前研究和新藥審評相關(guān)工作，

HPV16與人的子宮頸癌及其它多種癌瘤關(guān)系密切，HPV16感染在人群中呈明顯上升趨勢。預(yù)防HPV16感染可能預(yù)防人子宮頸癌及其它多種腫瘤。但因HPV16不能在體外及動物體內(nèi)生長，很難得到足夠病毒顆粒，因而無法進行疫苗研制。本實驗室利用基因工程技術(shù)分離HPV16 L1基因，并將它重組入桿狀病毒載體，使之在昆蟲細胞中表達，目前已

已有樣品/n成功構(gòu)建了新型黑猩猩型腺病毒AdC68和AdC7作為疫苗載體，以此為基礎(chǔ)，分別研制了兩種新型的埃博拉疫苗，即AdC68-EBOVgp、AdC7-EBOVgp，并在小鼠、非人靈長類動物中都驗證其免疫原性及保護性效果。對于埃博拉疫情的控制，目前尚無有效手段，以黑猩猩型腺病毒為載體的新型埃博拉疫苗的研發(fā)成功不僅將滿足患者的需求，而且將解決這一重大的公共衛(wèi)生問題，產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟效益和重大的社會價值。

創(chuàng)制出了一種基于細胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)的血清 4 型禽腺病毒滅活苗。通過懸浮培養(yǎng)技術(shù)，該血清 4 型禽腺病毒效價可達到 109 TCID50/ml，是傳統(tǒng)雞胚培養(yǎng)獲得的病毒效價的 100 倍。動物免疫效果表明，免疫后 21 天攻毒，非免疫對照組雞均全部死亡，觀察期內(nèi)發(fā)病雞多表現(xiàn)精神沉郁、羽毛粗亂、食欲不振，剖檢可見心包積液、肝臟病變等相關(guān)組織病變；免疫組均為 100%保護，觀察期內(nèi)未見任何異?，F(xiàn)象，剖檢未見腺病毒相關(guān)組織病變。高效價血清 4 型禽腺病毒滅活苗的研制可大大降低疫苗的成本，提供疫苗免疫效果，具

已有樣品/n成功將全長的西妥昔單抗基因分別克隆至腺病毒載體AdC68和Hu5，構(gòu)建重組腺病毒AdC68-CEb和Hu5-CEb，通過WesternBlot4證明成功表達了西妥昔單抗；我們進一步通過夾心ELISA對表達的西妥昔單抗進行了定量，產(chǎn)量分別為639g/L和522g/L；同時，我們通過間接免疫熒光證明了所表達的西妥昔單抗與EGFR結(jié)合的特異性；并通過MTT實驗證明了AdC68-CEb和Hu5-CEb顯著抑制結(jié)直腸癌細胞的生長，而對正常細胞沒有抑制作用；動物實驗顯示，用AdC68-CEb和Hu5

在我國，膀胱癌在泌尿系統(tǒng)腫瘤中占第一位，在經(jīng)濟、社會發(fā)展 中造成了嚴(yán)重的損失，危害十分嚴(yán)重。傳統(tǒng)的放、化療存在抗腫瘤能 力低、殺傷指數(shù)過小、副作用大等缺點。治療效果遠遠不能令人滿意。 因此，探索新的治療理念、策略和途徑，提高膀胱腫瘤的治療效果， 顯得十分迫切。 腺病毒是理想的腫瘤基因治療和生物治療載體。腺病毒載體由于 具有易于制備高滴度病毒、可感染分裂期和非分裂期細胞以及不整合 到宿主基因組等優(yōu)點而成為